ساخت باکیلوویروس نوترکیب کد کننده توام پروتئین های هماگلوتینین، نورآمینیداز و ماتریکس ویروس آنفلوانزای H1N1 خوکی و بیان آن در سلول های حشرات

تغییرات ژنتیکی ویروس آنفلونزا، هر ساله باعث ایجاد اپیدمی های جدید در سراسر دنیا می شود. ساخت یک واکسن جدید به منظور پیش گیری از ویروس آنفلونزا در چند سال اخیر هدف اصلی پژوهشگران بوده است. هدف ما از این پژوهش،ساختن باکیلوویروس نوترکیبی است که بتواند دو گلیکوپروتئین سطحی آنتی ژنیک هماگلوتینین و نورآمینیداز، به همراه پروتئین ماتریکس ویروس آنفلوانزاینوع A را به طور مستقل بیان نماید.
در این مطالعه تجربی، ابتدا کاست سه گانه ای که بیان هم زمان و مستقل سه ژن هماگلوتینی، نورآمینداز و پروتئین ماتریکس را تامین نماید، طراحی و سنتز شد. این کاست سپس در پلاسمید دهندهpFastBac1 کلون شد تا به پلاسمید دهنده pFastBacI HNM1 دست بیابیم. کلون مذکور در میزبان E.Coli DH10Bac با انجام ترانسپوزیشن همسان، بکمید نوترکیب را ساخت. این سازه پس از تائید با PCR، برای تکوین باکیلوویروس نوترکیب در سلول های حشرات SF9 تراریخت شد.
نتایج هضم آنزیمی، کلونینگ صحیح پلاسمید دهنده pFastBacI HNM1 را تایید نمود. طول صحیح نواحی تکثیر یافته هدف بر روی بکمید نوترکیب،دلیل بر صحت نوترکیبی همسان بین پلاسمید دهنده pFastBacI HNM1 و بکمید موجود در E.Coli DH10Bac بود. آثار ضایعات سلولی SF9 به دنبال تراریختی با بکمید نوترکیب، نشان دهنده تکوین موفق باکیلوویروس نوترکیب بود.آنالیز پروتئین های این سلول ها نشان داد هر سه پروتئین هدف به طور موثر و هم زمان بیان یافته اند.
باکیلوویروس نوترکیب ساخته شده در این طرح ویژگی های درست جهت قابلیت استفاده در تولید ذرات شبه ویروسی آنفلوانزا ویژه استرین خوکی را دارد.