انتقال سازه بیانی حاوی ژن های کایمریک IgG1 و Fv1 به رده سلولی تخمدان هامستر در بیان اینفلیکسیماب در سیستم بطری های غلطان

اینفلیکسیماب (Infliximab) شکلی از آنتی بادی های نوترکیب کایمریک می باشد که هدف مناسبی برای مهار فاکتور نکروز توموری آلفا در بیماری های التهابی است. پژوهش کنونی با هدف ارزیابی بیان آنتی بادی منوکلونال اینفلیکسیماب در مقیاس نیمه صنعتی در سلول تخمدان هامستر چینی انجام شد.
این مطالعه با هدف تولید نیمه صنعتی، از بهمن 1393 تا مرداد 1394 در مرکز رشد دانشگاه تهران انجام گردید. وکتور حاوی ژن های اینفلیکسیماب، به باکتری E.coli انتقال و وجود ناقل پلاسمیدی حاوی ژن برروی ژل 2% آگارز بررسی شد پلاسمید جداسازی و توسط لیپوفکتامین 2000 (Invitrogen، Germany) به سلول تخمدان هامستر چینی ترانسفکت شد. سلول ها توسط G-418، دو هفته تیمار و سلول های ترانسفکت شده انتخاب شدند. میزان تولید اینفلیکسیماب در کلون های انتخابی پس از 48 ساعت با کیت الایزا IgG، مورد سنجش قرار گرفت. کلون با بیان بالا کشت و محصول با ستون افینیتی پروتئین A خالص شد. جهت تایید خلوص، از روش Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) و برای تعیین راندمان تخلیص، از تست الایزا استفاده شد.
بررسی ژل آگارز، وکتور حاوی ژن را تایید نمود. ارزیابی غلظت اینفلیکسیماب پس از ترانسفکشن با استفاده از تست الایزا IgG در nm 450، بیشترین و کمترین میزان بیان را به ترتیب ng/ml 23 و ng/ml 6 نشان داد. در مرحله تخلیص با ستون افینیتی پروتئین A، پیک مربوط به اینفلیکسیماب، در بازه زمانی 7/0 الی 8/0 دقیقه مشاهده و راندمان تخلیص، 70% محاسبه شد و وجود باند های 25 و 50 کیلو دالتونی بر روی ژل پس از تخلیص حضور اینفلیکسیماب را تایید نمود.
در پژوهش کنونی بیان اینفلیکسیماب در مقیاس نیمه صنعتی با استفاده از سیستم بطری غلطان با درصد بیان بالا و راندمان تخلیص حدود 70% انجام شد.