کلونینگ و تعیین توالی بخشی از ژن تانناز در آسپرژیلوس نیجر

قارچ کپکی آسپرژیلوس نیجر به عنوان بیوراکتور عمده و میکروارگانیسم پاتوژن، آلرژن و آلوده کننده مواد غذایی مورد توجه بوده و با عنایت به افزایش موارد استفاده از این میکروارگانیسم به عنوان بیوراکتور، اهمیت آن رو به تزاید است. بنابراین، کلونینگ و تعیین توالی ژن تانین آسیل هیدرولاز یا تانناز جهت بررسی و آنالیز ویژگی های ژن سنتزکننده تانناز در این میکروارگانیسم و مقایسه خصوصیات ژن و فرآورده آن با همان ژن سایر میکروارگانیسم ها و در نهایت، تلاش برای بیان ژن و تولید محصول انجام شد، زیرا تانناز در تهیه و عمل آوری مواد غذایی، نوشابه ها و شربت ها در صنایع غذایی کاربرد دارد و در صنایع داروسازی نیز به عنوان ماده تجاری عمده برای ساخت تری متوپریم به کار می رود.
DNA ژنومی یک نمونه از آسپرژیلوس نیجر به شماره ثبت N404 که مشتق از آسپرژیلوس نیجر ATCC 9029 است، برای استخراج DNA و انجام مراحل بعدی مورد استفاده قرار گرفت و با استفاده از PCR دژنراتیو، یک قطعه اولیه از ژن تانناز به طول 990bp به دست آمد. قطعه ژن حاصله، متعاقب استخراج از ژل، خالص سازی و به وکتور مناسب پیوند زده شد و پس از ترانسفورماسیون، از سلول میزبان استخراج و تلخیص شد و توالی نوکلئوتیدی آن تعیین گردید.
آنالیز توالی محصول PCR دژنراتیو با بلاست BLASTX X، در سطح اسیدنوکلئیک همسانی بسیار زیاد این توالی را با توالی ژن تانناز در آسپرژیلوس اریزه آ، آ.آواموری و آ.اکلئوتوس نشان دادند (52-64%). کلونینگ و تعیین توالی ژن کامل تانناز در آ.نیجر و سپس بیان ژن و تهیه آنزیم در اشل صنعتی برای استفاده در صنایع داروسازی برای مراحل آتی این پژوهش مدنظر است.
وجود ژن تانناز در ژنوم آسپرژیلوس نیجر و همسانی بسیار بالای قطعه تعیین توالی شده با ژن تانناز سایر میکروارگانیسم های دارای قرابت فیلوژنیک با این قارچ نشان دهنده انتقال محافظه کارانه آن در مسیر تکاملی از ژنوم دودمانی است. توالی نوکلئوتیدی حاصله می تواند برای کلون کردن ژن کامل تانناز، تعیین توالی ژن کامل و نهایتا برای بیان ژن و تولید محصول مورد استفاده قرار گرفت.