بررسی میزان کارآیی روش Real-Time PCR با استفاده از دو راهکار رسم منحنی استاندارد و رگرسیون خطی

روش بکارگیری PCR جهت تکثیر یک قطعه خاصی از DNA اول بار توسطKerry Mullis در سال 1983 معرفی شد. امروزه تشخیص اسیدهای نوکلئیک با استفاده از PCR با پیشرفت تکنیک Real-Time PCR بطور قابل توجهی تسهیل شده است و همچنین آنالیز کمی mRNA با استفاده از Real-Time PCR بوسیله روش سایبرگرین بطور وسیعی در مطالعات بیولوژیک کاربرد پیدا کرده است. هدف این تحقیقق مقایسه کارایی PCR محاسبه شده با استفاده از دو روش شیب خط نمودار استاندارد و نرم افزار LinRegPCR جهت ارتقائ کیفیت محاسبه ی کارایی PCR می باشد.
در این پژوهش پس از خونگیری و اسنخراجRNA و سنتز cDNA فرایند qRT-PCR انجام شد.
سپس محاسبه ی PCR Efficiencyبه دو روش رسم منحنی استاندارد و همچنین با استفاده از نرم افزارLinReg PCR انجام گرفت و در نهایت این دو روش آنالیز با هم مقایسه شدند.
میزان کارایی PCR محاسبه شده برای سه ژن GAPDH، TGF βو IL-10با روش منحنی استاندارد به ترتیب 99/1، 81/1 و 87/1 و همچنین با روش استفاده از نرم افزار رایانه ای LinReg PCR کارایی این سه ژن به ترتیب 98/1، 82/1 و82/1 بدست آمد.
نتایج این تحقیق نشان می دهد که در آنالیز داده های حاصل از تکثیر cDNA میزان کارایی PCR بدست آمده برای سه ژن GAPDH، TGF βو IL-10 با دو روش مختلف منحنی استاندارد و LineRegPCR نتایج تقریبا یکسانی حاصل می شود.