جداسازی و تلخیص پروتئین پلاسمایی نوع A از سرم خانم های باردار در پایان سه ماهه سوم

پروتئین پلاسمایی مربوط به دوره بارداری نوع PAPP-A، گلیکوپروتئینی است که در طی بارداری در سلول های سین سیتیو تروفوبلاست جفت ساخته می شود و غلظت آن در سرم مادر همراه با پیشرفت مدت بارداری، افزایش می یابد. از آن جایی که غلظت آن 28 روز پس از بارداری قابل اندازه گیری است. مقدار این پروتئین تنها در خون مادران دارای جنین مبتلا به نشانگان داون در سه ماهه اول بارداری در مقایسه با مادران دارای جنین طبیعی کاهش می یابد. لذا در این پژوهش تخلیص PAPP–Aاز سرم خانم های باردار در آستانه زایمان صورت گرفته تا بتوان بر این اساس، در پژوهش های آتی روش ایمونولوژیکی مناسبی را برای اندازه گیری غلظت این پروتئین در سرم خانم های باردار در سه ماهه اول بارداری طراحی نمود.
جهت تخلیص PAPP–Aسه مرحله کروماتوگرافی که به ترتیب شامل: ژل فیلتراسیون به کمک ستون سفادکس، افینیتی کروماتوگرافی به کمک ستون هپارین - سفاروزو افینیتی کروماتوگرافی منفی به کمک ستونCNBr – activated sepharose 4Bمتصل شده به ایمونوگلوبولین های تولید شده بر ضد پروتئین های تام سرم انسان، بودند انجام گرفت. جهت تهیه ستون افینیتی کروماتوگرافی منفی نیاز به تهیه ایمونوگلوبولین بر ضد پروتئین های تام سرم انسان بود که برای این منظور، ایمونیزاسیون خرگوش با سرم طبیعی انسان و سپس تخلیص ایمونوگلوبولین تولید شده در طی دو مرحله متوالی افینیتی کروماتوگرافی صورت گرفت. پس از انجام مرحله سوم PAPP–Aتخلیص یافته حاصل گردید.
حجم مخلوط پروتئین های خانم های باردار در آستانه زایمان در پیک های اول، دوم، سوم و چهارم به ترتیب حدود 44، 40، 40 و 20 میلی لیتر بود.
روش اتخاذ شده در این پژوهش موجب به حداقل رساندن شرایط تخریب ساختمان PAPP – Aمی باشد.