y. yazdani
-
زمینه و هدف
توقف رگ زایی تومور، رشد سلول های توموری را به طور قابل ملاحظه ای کاهش می دهد. در این میان پروتئین فاکتور رشد فیبروبلاست- 2 (bFGF) به عنوان یک فاکتور رگ زایی مهم هدف مناسبی در مهار رگ زایی تومور و درمان سرطان است. هدف این مطالعه طراحی، ارزیابی و ساخت سازه ژنی نوترکیب در جهت بیان کارامد فیوژن پروتئینی است که دارای بخش های ایمونودامیننت توکسین سودوموناس همراه با bFGF است.
روش بررسیچگونگی حضور لینکرهای مختلف، بهینه سازی کدون های کد کننده اسیدهای آمینه و افزودن توالی سیگنال جهت افزایش ایمونوژنیسیته فیوژن پروتئین از جمله فاکتورهای مهم بوده که در این طراحی لحاظ گردیده است. پس از حصول اطمینان ازکارآمد بودن قطعه طراحی شده، قطعه نوکلئوتیدی کدکننده برای سنتز در وکتور کلونینگ pUC57 سفارش داده شد. سپس قطعه ژنی در سایت کلونینگ وکتور بیانی pET28-a قرار گرفت. با استفاده از آزمون های تکثیر ژنی و هضم آنزیمی وجود قطعه طراحی شده در وکتور بیانی مورد ارزیابی قرار گرفت.
یافته هابهینه سازی کدون های کد کننده سازه ژنی منجر به افزایش سازگاری کدون های خوانش از 69/ 0 به 83/ 0 شد. همچنین میزان محتوی (GC (GC contentپس از بهینه سازی از61 به 77/ 54 کاهش یافت. حضور باند 1214 جفت بازی به روش تکثیرژنی و باند 1029 جفت بازی به روش هضم آنزیمی در الگوی الکتروفورز تاییدکننده فرایند صحیح کلونینگ می باشد.
نتیجه گیریبراساس مطالعات صورت پذیرفته، این نخستین مطالعه در خصوص طراحی، ارزیابی و ساخت قطعه کد کننده مربوط به فیوژن پروتئینی است که واجد قطعات مربوط به دومین های ایمونودامیننت فاکتور رشد فیبروبلاست-2 و بخش ایمونودامیننت توکسین سودو است.
کلید واژگان: رگ زایی تومور، بخش ایمونودامیننت توکسین سودوموناس ائروژینوزا، فاکتور رشد فیبروبلاست 2، نرم افزار DNA2Background And Objectivethe inhibition of tumor-associated angiogenesis can significantly reduce the tumor proliferation. The basic fibroblast growth factor (bFGF), an important angiogenic factor, is considered as a potential therapeutic target for cancer therapy. The purpose of this study was evaluating, designing and construction of new recombinant DNA molecule in order to have efficient expression of a fusion protein consisting of the bFGF and immunodominant epitopes of Pseudomonas toxin.
Material And MethodsDifferent types of peptide linker, codon adaptation index (CAI) and adding signal peptide were considered in designing of immunogenic coding sequence. After software evaluation, the recombinant DNA molecule was ordered in the puc57 cloning vector. Then, coding sequence inserted into the multiple cloning site of pET28-a plasmid. Finally, PCR and enzymatic digestion tests were done for evaluation of recombinant expression vector.
ResultsOptimization of DNA sequence, codon adaptation index (CAI) increased from 0.69 to 0.83 and GC content decreased from 61 to 54.77. The presence of 1214-bp PCR product and 1029-bp one obtaining from enzymatic digestion confirmed the correction of the cloning process.
ConclusionAccording to the previous studies, it is the first work for designing, optimizing and synthesis of recombinant DNA consisting of bFGF and immunodominant epitopes of Pseudomonas toxin.
Keywords: Tumor angiogenesis, immunodominant epitopres of Pseudomonas toxin, Fibroblast growth factor 2, DNA 2 software -
مقدمه
هپسیدین یک پپتید ضد میکروبی غنی از سیستئین است که شکل پیش ساز آن از کبد ترشح می شود. این پپتید علیه دامنه وسیعی از باکتری ها، ویروس ها و قارچ ها عمل می کند. هپسیدین همچنین به عنوان اصلی ترین تنظیم گر هومئوستاز آهن بدن شناخته شده است. امروزه تلاش های گسترده ای برای تولیدهپسیدین صورت گرفته است. یکی از سیستم های بیانی یوکاریوتی مورد استفاده برای تولید هپسیدین، سیستم بیانی باکلوویروس می باشد. تولید سازه ژنی نوترکیب یکی از اصلی ترین مراحل در مسیر تولید هپسیدین در این سیستم بیانی است.
روش بررسیابتدا RNA تام از سلول های رده HepG2 به عنوان سلول تولید کننده هپسیدین استخراج شده و پس از سنتز cDNA کل، قطعه مربوط به هپسیدین انسانی توسط پرایمر های اختصاصی هپسیدین به روش PCR تکثیر شد. در مرحله بعد این قطعه درون ناقل pTZ57R/T کلون شد. در پایان قطعه مربوطه به روش برش آنزیمی توسط آنزیم های BamHI و ECoRI به درون محل ورود ژن در ناقل pFast BacHT B منتقل شد.
یافته هاقطعه کد کننده هپسیدین انسانی به طور صحیح درون ناقل pTZ57R/T کلون شده و مراحل ساب کلونینگ درون ناقل pFast Bac HT B با موفقیت انجام شد. حضور باند 274 جفت بازی حاصل از تکثیر PCR و برش آنزیمی نشان دهنده صحت مراحل انجام کار بود.
نتیجه گیریبر اساس جستجوهای انجام شده این مطالعه نخستین مورد از تولید سازه ژنی نوترکیب واجد قطعه کد کننده هپسیدین کامل انسانی در کشور است. سازه های ژنی نوترکیب حاصل از این مطالعه می تواند به منظور تولید فرم کامل هپسیدین انسانی در مطالعات آینده مورد استفاده قرار گیرد.
کلید واژگان: بکمید، هپسیدین، آهنBackground And ObjectiveHepcidin is a cystein-rich antimicrobial peptide، which is secreted by the liver. It fights against wide spectrum of bacteria، viruses and fungi and it is a major regulator of iron homeostasis. Today، scientists have made many efforts on the production of hepcidin. Baculovirus expression system is one of the best eukaryotic expression systems for production of recombinant hepcidin and production of the recombinant vector is one of the most important steps in this expression system.
Material and MethodsFirst، the total RNA was separated from HepG2 cell line as a source of hepcidin expression. Then، after synthesis of total cDNA، human hepcidin sequence was amplified، using specific primers by PCR method. Next، hepcidin sequence was cloned into pTZ57R/T vector. After digestion of recombinant vector using ECoRI and BamHI restriction enzymes، recombinant pFastBac HT B vector containing human hepcidin cDNA was produced.
ResultsCoding sequence of human hepcidin is correctly cloned into pTZ57R/T vector and sub cloning into pFastBac HT B vector is performed successfully. The presence of a clear band near 274 bp resulted from PCR amplification and restriction enzyme are the confirmation of the cloning of human hepcidin.
ConclusionAccording to our knowledge، the present study is the first work that focuses on recombinant vector containing coding sequence of human prohepcidin. This recombinant vector can be used for human hepcidin production.
Keywords: Bacmid, Hepcidin, Iron
- در این صفحه نام مورد نظر در اسامی نویسندگان مقالات جستجو میشود. ممکن است نتایج شامل مطالب نویسندگان هم نام و حتی در رشتههای مختلف باشد.
- همه مقالات ترجمه فارسی یا انگلیسی ندارند پس ممکن است مقالاتی باشند که نام نویسنده مورد نظر شما به صورت معادل فارسی یا انگلیسی آن درج شده باشد. در صفحه جستجوی پیشرفته میتوانید همزمان نام فارسی و انگلیسی نویسنده را درج نمایید.
- در صورتی که میخواهید جستجو را با شرایط متفاوت تکرار کنید به صفحه جستجوی پیشرفته مطالب نشریات مراجعه کنید.