کلونینگ و بیان ژن ipaC شیگلا دیسانتری

عامل شیگلوزیز، میکروب های جنس شیگلا هستند. با توجه به فراوانی بیماری و مرگ و میر گزارش شده و مقاومت آنتی بیوتیکی باکتری، طراحی و ساخت واکسن علیه این بیماری از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. از مهم ترین عوامل ویرولانس باکتری، آنتی ژن های تهاجمی پلاسمید به ویژه IpaC و IpaB هستند که به عنوان کاندیدای واکسن نیز مطرح هستند. هدف این مطالعه بیان ژن ipaC یکی از عوامل تهاجمی به منظور بررسی ایمنی زایی بود.
در این مطالعه توالی ژن ipaC از بانک ژنی NCBI به دست آمد و طراحی پرایمر صورت گرفت. ژنوم استخراج شده از شیگلا دیسانتری به عنوان الگو در تکثیر PCR مورد استفاده قرار گرفت. سپس ژن ipaC تکثیر یافته، در پلاسمید pTZ57R کلون و در وکتور بیانی pET-28a(+) ساب کلون شد. E. coli سویه BL21(DE3)plysS توسط وکتور نوترکیب ت ر انسفورم و بیان پروتئین تحت القای IPTG و الکتروفورز SDS-PAGE مورد ارزیابی قرار گرفت.
کلونینگ این ژن با روش های PCR، هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید شد. همچنین پروتئین نوترکیب با القای IPTG بیان شد. با تخلیص از ستون نیکل، وسترن بلاتینگ و الکتروفورز SDS-PAGE بیان پروتئین مورد تایید قرار گرفت.
کلونینگ، ساب کلونینگ و بیان ژن ipaC در این مطالعه تایید می شود. پس از بررسی ایمنی زایی، این پروتئین نوترکیب می تواند در مطالعات آینده برای تولید واکسن نوترکیب علیه باکتری شیگلا دیسانتری مورد استفاده واقع شود.