بهینه سازی و بیان ژن طراحی شده stxA واجد سه جهش هدفمند

شیگلا دیسانتری با تولید سم stx (با دو زیر واحد AوB) یکی از مهم ترین، باکتری های بیماری زای روده ای برای انسان است. این سم با ورود به سلول های اپیتلیال باعث مهار سنتز پروتئین و مرگ سلولی خواهد شد. علیرغم مطالعات فراوان جهت تولید واکسن، هنوز ضرورت تداوم مطالعه در دست یابی به پروتئین نوتر یب از نوع StxA وجود دارد. هدف از این مطالعه، طراحی ژن stxA جهش یافته و تولید پروتئین بیانی آن به عنوان کاندید واکسن علیه شیگاتو کسین جهت بررسی ایمنی زایی آن در مطالعات بعدی می باشد. پس از طراحی و تهیه ژن صناعی pET28a-stxA جهش یافته (G234E- E167Q -A231D)، واکنش PCR جهت کنترل صحت حضور این ژن انجام گردید. پس از انتقال این وکتور به سلول میزبان E. coli BL21، بیان، بهینه سازی، تخلیص و درنهایت تایید پروتئین حاصل بررسی گردید. نتیجه مطالعات اولیه، منجر به طراحی ژن stxA جهش یافته گردید. نتایج واکنش PCR با استفاده از پلاسمید سنتتیک نشان از صحت ژن مورد مطالعه داشت. سپس بیان این ژن در سلول میزبان E. coli BL21، بهینه سازی گردید که در نتیجه تولید مقادیر زیادی از این پروتئین به شکل اجسام توده ای نشان داده شد. تخلیص اجسام توده ای و سپس محلول سازی پروتئین های آن از روش های تلفیقی صورت گرفت. با توجه به مکانیسم اثر شیگاتوکسین پیش بینی می شود که این پروتئین جهش یافته دارای اثر سمیت کم تری نسبت به سایر جهش یافته های قبلی کاندید واکسن داشته باشد، و در نتیجه بتواند به عنوان کاندید واکسن برتر مطرح گردد.