همسانه سازی و بیان ژن ناحیه یک فاکتور کشنده ی (Lethal Factor) باسیلوس آنتراسیس در باکتری Escherichia coli

سیاه زخم (آنتراکس) یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری باکتری باسیلوس آنتراسیس می باشد که آنتی ژن حفاظت کننده (PA) و ناحیه یک فاکتور کشنده (LFD1) ایمونوژن های قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شده اند. هدف این مطالعه تولید آنتی ژن ناحیه یک فاکتور کشنده(LFD1) در باکتری Escherichia coli می باشد.
در این مطالعه تجربی آزمایشگاهی ژن LFD1 از پلاسمید pXO1 شناسایی و با واکنش PCR تکثیر شد. با جایگاه های آنزیمی BamH I و Xho Iدر وکتور (pGEM-T easy) همسانه سازی شد و بعد از جداسازی به وکتور بیانی pET28a(+) زیرهمسانه سازی گردید. این وکتور به باکتری E. coli-BL21 (DE3) تراریخت (ترانسفورم) شد. بیان ژن LFD1 تحت القای ایزوپروپیل-β -D -I-گالاکتوپیرانوزید (IPTG) انجام و پروتئین مورد نظر بیان شد.
ژن ناحیه یک فاکتور کشنده (LFD1) کلون شده در وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله ی توالی یابی، PCR و هضم به وسیله آنزیم های با اثر محدود تایید گردید. همچنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله سدیم دودسیل سولفات پلی آکریل آمید ژل (SDS-PAGE) و لکه گذاری وسترن تایید گردید.
با توجه به ایمونوژن بودن پروتئین LFD1، پروتئین نوترکیب تولید شده در این تحقیق را می توان به صورت مجزا یا ترکیبی با یاورها و یا انتقال دهنده ها در طراحی واکسن برای بیماری سیاه زخم استفاده نمود.