کلون و بیان مولکولی ژن رتپلاز در سلول های باکتری اشریشیا کولی با استفاده از پروموتر tac

این مطالعه با هدف کلون و بیان cDNA رتپلاز، داروی ترومبولیتیک مورد استفاده در درمان انفارکتوس میوکارد و سکته ی مغزی، و با کنترل پروموتر tac در سلول های E. Coli (Escherichia coli) طراحی شد.
ژن رتپلاز با استفاده از پرایمرهای مناسب و طی واکنش زنجیره ای پلیمراز (Polymerase chain reaction یا PCR) تکثیر شد. محصول به دست آمده در پلاسمید pTZ57R کلون گردید. DNA به دست آمده توسط آنزیم های محدودکننده برش داده شد و به درون وکتور بیانی pGEX-5x-1 وارد گردید. وجود قطعه ی واردشده در وکتور بیانی با کمک هضم آنزیمی و تعیین توالی نوکلئوتیدی تایید شد. بیان رتپلاز موجود در سلول های E. Coli TOP10 با استفاده از افزودن غلظت های 2/0، 5/0 و 1 میکرومول از IPTG (Isopropyl beta-D thiogalactopyranoside) القا شد و سپس تحت آنالیز با SDS-PAGE قرار گرفت.
الکتروفورز محصول PCR و همچنین هضم آنزیمی پلاسمید pTZ57R نوترکیب، باند 1068 جفت بازی رتپلاز را نشان داد. آنالیز SDS-PAGE نشان دهنده ی یک باند پروتئین 60 کیلودالتونی بود که در اثر القای بیان با IPTG تولید شده بود.
در این مطالعه cDNA رتپلاز با استفاده از پروموتر tac در سلول های E. Coli به طور موفقیت آمیزی کلون و بیان شد.