تاثیر شوک حرارتی و تیمارهای هورمونی در انتقال ژن به ذرت (Zea mays) توسط اگروباکتریوم

انتقال ژن با کارایی بالا به ذرت Zea mays L.) (با استفاده از یک ناقل دوگانه استاندارد کاربرد زیادی در مطالعات مهندسی ژنتیک و ژنومیکس کاربردی دارد. هدف از انجام این پژوهش افزایش میزان تراریختی ارقام ذرت با استفاده از تیمار شوک حرارتی و هورمون های گیاهی است. در این مطالعه جنین های نارس ذرت mm) 2 – 5/1) مربوط به ارقام B73 و Mo17 با استفاده از Agrobacterium tumefaciens سویه AGL01 حاوی ناقل دوگانه pCAMBIA3301 آلوده شدند. جنین ها قبل از آلودگی تحت تیمار 1T (Co46 به مدت 3 دقیقه، یک دقیقه در یخ٬ 30 دقیقه سانتریفوژ × g000،20 در Co4) و 2T (بدون تیمارهای حرارتی و سانتریفوژ) قرار گرفتند. همچنین ترکیباتی مانند دی تیوتریتول (DTT) و پلورونیک اسید F68 (F68) به محیط هم کشتی اضافه شده و با هم مقایسه شدند. نتایج حاصل از آزمایش ها نشان داد که استفاده از تیمارهای دمایی و سانتریفوژ، انتقال ژن به B73 را کمی بهبود بخشیده در حالی که در انتقال ژن gus به Mo17 هیچ تغییری ایجاد نمی کند. همچنین اضافه کردنDTT و یاF68 به محیط هم کشتی منجر به افزایش چشمگیر انتقال T-DNA به B73 شد، در عین حال در رقم Mo17 هیچ نتیجه امیدبخشی مبنی بر انتقال ژن مشاهده نشد. در رقم B73، بسته به نوع تیمار 18-5 درصد از جنین های نارس، کالوس های مقاوم به فسفینوتریسین تولید کردند. آزمون هیستوشیمیایی بر روی کالوس های مقاوم بعد از 8 هفته در محیط انتخابی و همچنین PCR که تاکیدی بر انتقال و بیان ژن گزارشگر gus بودند، فرکانس 18 درصدی انتقال ژن در تیمارهای 1T به همراه F68 را در مقابل فرکانس صفر درصدی انتقال ژن در کالوس های مقاوم از تیمارهای 2T و بدون دترجنت نشان دادند. با توجه به نتایج حاصل تیمار 1T به همراه F68 برای انتقال ژن بواسطه اگروباکتریوم به رقم B73 ذرت پیشنهاد می شود.