تولید آنتی بادی علیه پروتئین غشایی Candidatus Phytoplasma aurantifolia

بیماری جاروک لیموترش توسط Candidatus Phytoplasma aurantifolia ایجاد شده و یکی از مخرب ترین بیماری های لیموترش در مناطق جنوب کشور به شمار می رود. در حال حاضر روش کنترل موثری برای این بیماری معرفی نشده است. بنابراین قرنطینه، تشخیص زودهنگام و متعاقب آن ریشه کنی درختان آلوده اهمیت فراوانی دارد..
برای دست یابی به این هدف، معرفی روش ردیابی دقیق و حساس اولین قدم برای جلوگیری از انتقال مواد گیاهی آلوده به سایر مناطق خواهد بود.. در این پژوهش پروتئین غشایی فیتوپلاسما (Immunodominant membrane protein، IMP) به عنوان هدف جهت ردیابی و تهیه آنتی بادی پلی کلونال انتخاب و ژن رمزکننده آن جداسازی و در ناقل بیانی باکتریایی pET28a همسانه سازی شد. پروتئین نوترکیب در مقادیر بالا در باکتری Escherichia coli استرین BL21 بیان شد. خالص سازی پروتئین در شرایط طبیعی با روش کروماتوگرافی تمایلی در ستون های حاوی رزین (Ni-NTA) انجام گرفت و کمیت و کیفیت آن به وسیله روش وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی اختصاصی علیه دنباله هیستیدین و علیه IMP بررسی گردید. پروتئین نوترکیب خالص شده برای ایمنی زایی خرگوش استفاده گردید..
ایمونوگلوبولین (IgG) به دست آمده با استفاده از ستون های کروماتوگرافی حاوی پروتئین A خالص سازی شد و آنتی بادی متصل به آنزیم آلکالین فسفاتاز برای ردیابی موثر گیاهان آلوده در آزمون های داس-الایز و دیبا به کار برده شد..
نتایج این پژوهش نشان داد که آنتی بادی تولید شده ابزاری قوی برای ردیابی Candidatus Phytoplasma aurantifolia در گیاهان آلوده است..