بهینه سازی کدون، کلونینگ و بیان فاکتور مهارکننده لوسمی انسان در اشرشیا کولی

فاکتور باز دارنده لوسمی انسانی (hLIF)، سایتوکاینی پلیوتروپیک می باشد که عضو خانواده ی اینترلوکین-6 (IL-6) است. این سایتوکاین یکی از مهمترین اعضای خانواده ی سایتوکاین IL-6 می باشد. سایتوکاین LIF دارای اثرات چندگانه تنظیمی بر روی انواع مختلف بافت ها و سلول ها هم در in vivo و هم در in vitro است. این مولکول یک فاکتور لمفوئیدی است که دارای فعالیت های متعددی از جمله، تمایز نورون های کولینرژیک، کنترل پرتوانی سلول های بنیادی، متابولیسم استخوان و چربی و غیره بوده و برای لانه گزینی جنین حائز اهمیت است و در پیشبرد تولید مگاکاریوسیت ها در محیط آزمایشگا ه دخالت دارد. rhLIF دارای پتانسیل هایی است که به یک کاندید تراپوتیک برای برخی بیماری ها مانند MS تبدیل گشته است. این فاکتور دارای اثراتی بر سلول های پیش ساز خونی، سطوح پروتئین C reactive و بازیابی سلول های خون ساز پس از شیمی درمانی بوده و از تکثیر ویروس HIV-1 جلوگیری می نماید. LIF نوترکیب سبب ا فزایش میزان تحرک و ابقاء اسپرم در مردان Asthenosperm نیز می گردد..
به دلیل کاربردهای LIF در سیستم زیستی، این ژن در گونه های مختلفی کلون گردیده است. در این تحقیق هم از یک روش کاربردی و بهینه کلون LIF استفاده گردیده است..
در این تحقیق توالی cDNA بهینه و سنتز گردید، سپس در وکتور بیانی pET-28a(+) تحت کنترل پروموتر T7 و محل برش آنزیم های محدودکننده ی BamHI و XbaI کلون شد. وکتور نوترکیب به درون باکتری اشرشیا کولی، سویه ی BL21 ترانسفورم گشته و به صورت یک پروتئین متصل به His.tag بیان گردید. صحت کلون شدن ژن مورد نظر با روش هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید. همچنین برای بررسی بیان، از روش SDS-PAGE و Western-blotting از نمونه های القاء شده با IPTG استفاده شد..
نتایج بیان پروتئین نوترکیب kDa 7/19 فاکتور باز دارنده لوکمیا یی انسانی را در سیستم باکتریایی نشان داد..
بهینه سازی کدون، سبب افزایش تولید پروتئین نوترکیب hLIF در اشرشیا کولی می گردد. این نتیجه در موارد مشابه که بیان ژن حیاتی است، کاربردی می باشد..