بیان پروکیموزین گاوی در سیستم بیانی پیچیا پاستوریس GS115

عصاره شیردان گوساله شیرخوار شامل پروکیموزین بوده که سپس در معده آن در اثز شکستگی تبدیل بفرم فعال آن یعنی کیموزین میگردد که یک آنزیم مورد استفاده در صنعت پنیر سازی برای انعقاد شیر میباشد. نشان داده شده است که کیموزین نوترکیب به عنوان یک جایگزین مناسب برای کیموزین طبیعی استخراج شده از معده گوساله میباشد. ضمنا این کیموزین مزایای زیادی نسبت به سایر آنزیمهای منعقد کننده شیر بدست آمده از منابع باکتریایی، قارچی و گیاهی دارد..
در پژوهش حاضر، بررسی بیان آنزیم مهم پروکیموزین در سیستم بیانی یوکاریوتی برای استفاده آینده در صنعت پنیر سازی بررسی شد..
ژن پروکیموزین گاوی در سیستم بیانی مخمر متیلوتروفیک پیچیا پاستوریس با استفاده از وکتور بیانی pPIK9K بیان شد. پلاسمید نوترکیب با استفاده از روش الکتروپوریشن بداخل مخمر ترانسفورم و پروتئین مورد نظر در شرایط بهینه بیان شد (دما 29°C، 200 دور در دقیقه، 2 درصد متانول برای القا و 5 روز انکوباسیون در این شرایط). رونویسی و بیان ژن کیموزین نوترکیب با استفاده از روش های RT-PCR، SDS-PAGE analysis، وسترن بلاتینگ و الایزا مورد بررسی قرار گرفت..
در شرایط بهینه میزان کمی از پروتئین نوترکیب با استفاده از روش الایزا اندازه گیری شد که این بیان بوسیله روش RT-PCR تایید گردید..
با توجه به اینکه سیستم پیچیا پاستوریس بعنوان یک سیستم مناسب برای بیان پروتئنهای نوترکیب معرفی شده باید در تحقیقات آینده علت سطح پایین بیان پروکیموزین در این سیستم مورد بررسی بیشتر قرار گیرد.