تهیه آزمایشگاهی وکتور T/A برای تسهیل همسانه سازی قطعات DNA حاصل از PCR مهندسی ژنتیک

امروزه مهندسی ژنتیک جزء اجتناب ناپذیر پژوهش های زیست شناسی نوین میباشد و همسانه سازی به عنوان یکی از اصلی ترین بخش های این علم، کاربرد گسترده ای دارد. پلاسمیدها یکی از پر کاربردترین حامل ها میباشند که امکان تکثیر ژن مورد نظر را به صورت نامحدود در میزبان عمدتا«باکتریایی فراهم میکنند. وکتورهای T/A نوعی از حامل های پلاسمیدی میباشند که امکان همسانه سازی قطعه دی ان ای تکثیر شده با آنزیم Taq DNA polymerase (در واکنش زنجیره ای پلیمراز) را تسهیل می کنند. با توجه به محدودیت امکانات، خرید کیت همسانه سازی حاوی این پلاسمید ممکن است به سختی میسر باشد. به همین جهت تهیه این وکتور با کارایی خوب در آزمایشگاه حائز اهمیت است. در این پژوهش، بعد از تهیه سلول های مستعد (رقیب) از باکتری Escherchia coli، پلاسمید حلقوی و فاقد قطعه خارجی pTZ57R به این سلول ها ترانسفورم گردید. پس از استخراج پلاسمید به روش لیز آلکالینی، با آنزیم EcoRV پلاسمید برش داده شده و خطی گردید. سپس آنزیم برشی غیرفعال گردید و نوکلئوتید تیمین به انتهای آزاد این پلاسمید خطی اضافه شد. سپس کارایی حامل تهیه شده طی واکنش اتصال دی ان ای به پلاسمید و متعاقب آن، ترانسفورماسیون باکتری تایید گردید. بعلاوه، بخشی از ژنوم پوتی ویروس که با جفت آغازگر یونیورسال مورد تکثیر قرار گرفته بود در پلاسمید ساخته شده مورد همسانه سازی وترادف یابی قرار گرفت که در مقایسه با توالی های هم قطار موجود در پایگاه ژن بانک بعنوان ویروس موزائیک سویا تشخیص داده شد.