ارزیابی کینتیکی آنزیم نیتریک اکسید سنتاز استخراج شده از کلیه گوسفند

نیتریک اکسید (NO) از طریق نیتریک اکسید سنتاز (NOS) و از ال- آرژینین تولید شده و در پروسه های فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی متعددی از سیستم های بیولوژیکی نقش دارد. در این بررسی، فعالیت های کینتیکی NOS جدا شده از کلیه گوسفند مورد ارزیابی قرار گرفت.
با استفاده از تکنیک های هموژنیزاسیون، رسوب توسط سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی ستونی روی DEAE-32سلولز و''2، ''5-ADP-آگاروز، آنزیم NOS از 500 گرم از بافت کلیه گوسفند، جدا و خالص سازی شد. در هر مرحله از روند خالص سازی این آنزیم، مقدار پروتئین و فعالیت آن با استفاده از روش های برادفورد و گریس بررسی شد.
در این بررسی، وزن ملکولی NOS کلیه گوسفند در الکتروفورزSDS-PAGE، 54 کیلو دالتون بود. فعالیت ویژه، 6/0 واحد بر میلی گرم پروتئین و بازده خالص سازی آن نیز 9/0 درصد (خلوص نسبی 20 برابر) به دست آمد. pH و دمای اپتیم این آنزیم نیز به ترتیب 4/7 و 30 درجه سانتیگراد به دست آمد و انکوباسیون پروتئین نشان داد که در محدوده دمایی 10 تا 30 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه، آنزیم پایدار می باشد. در غلظت 75 میکرو مول از سوبسترای ال-آرژینین، بیشترین فعالیت NOS مشاهده شد. Vmax و Km آنزیم به ترتیب 250 نانو مول در دقیقه در میلی گرم پروتئین و 32/5 میکرومول به دست آمد.
نزیم NOS از کلیه گوسفند با خلوص نسبی 20 برابر خالص سازی شد و دمای اپتیمم، pH، غلظت مناسب سوبسترا، Vmax و Km آن به ترتیب 30 درجه سانتیگراد، 4/7، 75 میکرومول، 250 نانو مول در دقیقه در میلی گرم پروتئین و 32/5 میکرومول به دست آمد.