جداسازی Sarcocystis hirsuta از همبرگر سنتی تولیدی در ایران به روش PCR-RFLP

سارکوسیستوزیز از شایع ترین بیماری های زئونوز محسوب می شود که توسط انگل های جنس Sarcocystis ایجاد می گردد. Sarcocystis تک یاخته ی درون سلولی دو میزبانه و شاخه ی اپی کمپلکسا می باشد. سه گونه ی شناخته شده ی Sarcocystis، گاو را به عنوان میزبان واسط آلوده می نماید که شامل S. cruzi، S. hirsuta و S. hominis می باشند و سگ، گربه و انسان به ترتیب میزبانان نهایی هستند.
یک نمونه ی همبرگر سنتی عرضه شده در شهر یزد خریداری و به آزمایشگاه منتقل شد. جهت انجام استخراج DNA ژنومی، از روش Salting out استفاده شد. جهت شناسایی انگل جنس سارکوسیست و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، قطعه ای خاص از ژن (s rRNA18 یا S ribosomal RNA18) این انگل تکثیر شد که نتیجه ی حاصل از الکتروفورز، باند bp 953 را نشان داد که بیانگر جنس Sarcocystis بود. سپس به منظور تعیین گونه ی انگل، از آنزیم های BfaI و RsaI جهت ایجاد برش بر قطعه ی تکثیر شده استفاده گردید و باندهای حاصل از برش آنزیم ها، بر روی ژل آگارز الکتروفورز شدند.
پس از برش با آنزیم BfaI دو باند به اندازه ی bp 397 و bp 557 مشاهده شد. بعد از ایجاد برش توسط آنزیم RsaI، دو باند bp 376 و bp 577 مشاهده شد که دلیل بر وجود گونه ی Sarcocystis hirsuta می باشد.
در این گزارش، وجود Sarcocystis hirsuta در همبرگر سنتی را می توان به تماس نزدیک گربه با دام در مزارع که سبب آلودگی آب و غذای دام به مدفوع آلوده ی گربه می شود، نسبت داد. بر اساس جستجو در منابع پایگاه های اطلاعات علمی، این تحقیق اولین گزارش تشخیص مولکولی Sarcocystis hirsuta به روش PCR-RFLP Polymerase chain reaction- restriction fragment length polymorphism)) در همبرگرهای سنتی تولیدی در ایران بود.