کلونینگ ملکولی ژن آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم سویه واکسن در اشریشیا کلی

کلستریدیوم سپتیکوم یک باکتری گرم مثبت بی هوازی است که تعدادی توکسین از جمله آلفا، بتا، گاما و دلتا را تولید می کند. آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم کشنده بوده و مسئول بیماری بسیار خطرناک قانقرایای گازی است. هدف مطالعه حاضر کلونینگ ملکولی و توالی یابی ژن آلفا توکسین کلستریدیوم سپتیکوم سویه واکسینال(CN913) است. از سوسپانسیون کشت شبانه باکتری، DNA ژنومیک به وسیله روش استاندارد فنل کلروفرم تخلیص و ژن آلفا توکسین با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده و به روش واکنش زنجیره ای پلیمراز تکثیر شد. کمیت و کیفیت محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از الکتروفورز ژل آگارز تعیین و به روش اسپکتروفوتومتری تائید گردید. محصول واکنش زنجیره ای پلیمراز تخلیص ودر وکتورکلونینگ pJET1.2blunt لایگیت شد. سپس سلول مستعد E. coli/TOP10 به وسیله آن ترانسفورم گردید. پلاسمید نوترکیب pJETαsep از کلونE. coli/TOP10/pJETαsep تخلیص و ژن آلفا توکیسن به وسیله پرایمرهای یونیورسال توالی یابی شد. توالی یابی و آنالیز بلاست ژن csa بیش از 99% تشابه را با سایر ژنهای csa موجود در بانک ژن نشان داد. این توالی با شماره JN793989 در بانک ژن ثبت گردید. از سویه E. coli/TOP10/pJETαsep می توان به عنوان یک کلون نوترکیب باکتریائی برای تخلیص ژن csa و بیان آن در میزبان مناسب استفاده نمود.