تشخیص مقاومت به افلوکساسین با روش مولکولی سریع Allele Specific PCR در مایکوباکتریوم توبرکلوزیس

مقاومت به فلوروکینولون ها در بیماری سل رو به گسترش است. تشخیص مقاومت به روش کشت خلط دو ماه به طول می انجامد. مطالعه حاضر، به منظور طراحی روشی برای تشخیص سریع مقاومت سویه های کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس به افلوکساسین انجام شد.
در این مطالعه، DNA های استخراج شده از 41 سویه کلینیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس حساس و مقاوم به افلوکساسین موجود در بانک DNA مرکز تحقیقات سل و بیماری های عفونی با دو روش مولکولی آلل اسپسیفیک پی سی آر (AS-PCR) و تعیین ترادف (سکوئنس)، برای تعیین موتاسیون در منطقه مرتبط با مقاومت ژن gyrA با هم مقایسه شدند. پرایمرهای داخلی برای تشخیص موتاسیون های مرتبط با مقاومت طراحی و شرایط PCR تعیین شد. قطعه مورد نظر درتعدادی از نمونه ها تعیین ترادف شده و به عنوان استاندارد طلایی با روش های ارائه شده مقایسه شد.
روش AS-PCR به خوبی قادر به تشخیص موتاسیون با تشکیل یا عدم تشکیل باند داخلی شد که نشان دهنده طراحی صحیح پرایمرها بود. روش AS-PCR اجرا و با توجه به نتایج بسیار خوب به عنوان روش عادی استفاده شد. در مجموع، از 41 سویه کلونیکی مایکوباکتریوم توبرکلوزیس مطالعه شده، 37 سویه از نظر فنوتیپی (به روش کشت proportion) مقاوم به افلوکساسین و 4 سویه حساس به این دارو بودند. از 37 سویه مقاوم از نظر فنوتیپی، 32سویه با روش AS-PCR مقاوم به افلوکساسین و 5 نمونه حساس تعیین شدند. نتایج تعیین ترادف، با نتایج روش های استفاده شده انطباق داشت. حساسیت و ویژگی روش به ترتیب معادل 11/86 درصد و 100 درصد به دست آمد.
نتایج مطالعه حاضر نشان می دهد که روش AS-PCR طراحی شده می تواند به عنوان یک روش ساده و سریع برای تعیین حساسیت و مقاومت به افلوکساسین در سویه های مایکوباکتریوم توبرکلوزیس استفاده شود. این روش تا کنون در منابع علمی گزارش نشده است.