کلونینگ و بیان ژن کد کننده آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس پومیلوس سویه GAZ23

لاکازها (بنزن دیول اکسیژن اکسیدو ردوکتاز EC 1. 10. 3. 2) یکی از اعضای خانواده مالتی کوپر اکسیدازها هستند که اکسیداسیون طیف گسترده ای از ترکیبات فنولی را با استفاده از اکسیژن مولکولی کاتالیز می کنند.
ژن کد کننده آنزیم لاکاز از سویه GAZ23 به وسیله پرایمرهای کلونینگ اختصاصی ژن تکثیرشد. محصول PCR در ناقل بیانی (pET21a) کلون به باکتری اشریشیا کلی سویه BL21(DE3) انتقال یافت و تحلیل توالی انجام شد. بیان آنزیم با استفاده از سوبسترای معمول لاکاز ABTS سنجیده شد.
توالی ژن S rDNA 16 سویه بومی GAZ23 که از خاک های ایران جدا شده است دارای 100 درصد شباهت به باکتری باسیلوس پومیلوس بود. ژن لاکاز در سویه GAZ23 دارای 1533 نوکلئوتید است که 510 آمینواسید را کد می کند.
ژن لاکاز سویه GAZ23 دارای 67 درصد شباهت آمینواسیدی به پروتئین CotA باکتری باسیلوس سوبتیلیس است. به منظور به دست آوردن مقادیر بالای پروتئین محلول، بیان، تحت شرایط میکروآئروبیک و در دمای پایین انجام شد. 4 دمین غنی از هیستیدین متصل شونده به مس در توالی آمینواسیدی این پروتئین وجود دارد.