همسانه سازی فرم اصلاح ژن tPA انسانی در ناقل کلروپلاستی و باززایی گیاهان ترانسپلاستومیک توتون

گیاهان جایگزین مناسبی برای سیستم های معمول بیان پروتئین های نوترکیب و داروهای زیستی، نظیر حیوانات یا سیستم های میکروبی تراریخته می باشند. به دلیل پلی پلوئیدی بالای ژنوم پلاستید گیاهی، در صورت تراریختی کلروپلاست، هزاران نسخه از ژن خارجی در هر سلول وارد و حجم بسیار بالایی از پروتئین نوترکیب تولید می شود. پس از سرطان ها، بیماری های قلبی- عروقی دومین عامل مرگ و میر انسانی هستند. فعال کننده پلاسمینوژن بافتی انسانی (tPA) یکی از مهمترین پروتئین های نوترکیب داروئی است که جهت از بین بردن لخته خون در قسمت های مختلف بدن از جمله رگ های خونی قلب و مغز استفاده می شود. فرم اصلاح شده پلاسمینوژن بافتی (K2S) دارای نیمه عمر پلاسمایی طولانی تر، قدرت نفوذ در لخته و فعالیت فیبرینولیتیک بالاتر می باشد. در این مطالعه، به منظور انتقال ژن K2S به کلروپلاست گیاه توتون، پس از طراحی سازه، ژن هدف در ناقل کلروپلاستی pKCZ درج و سپس در باکتریcoli. E همسانه سازی گردید. پس از شلیک موفق ناقل حاوی ژن (K2S (pKCZK2S به ریزنمونه های برگی با استفاده از تکنیک بیولستیک، ریزنمونه ها بر روی محیط انتخابی حاوی 500 میلی گرم در لیتر آنتی بیوتیک اسپکتینومایسین قرار گرفتند. پس از باززایی نوساقه های رشد یافته بر روی محیط انتخابی، به منظور رسیدن به هموپلاسمی چهار دوره انتخاب و باززایی در حضور آنتی بیوتیک اسپکتینومایسین انجام شد. حضور، درج در جایگاه مشخص، بیان ژن K2S و هموپلاستی در گیاهان ترانس پلاستومیک با روش های PCR، RT-PCR و سادرن بلات به تایید رسید.