طراحی و ساخت کلون بیان کننده داروی ضد انعقادی دسیرودین (هیرودین) به شکل خارج سلولی در اشرشیا کلی
نویسنده:
چکیده:
سابقه و هدف
هیرودین پلی پپتیدی با 65 تا 66 اسید آمینه است که به عنوان داروی ضدانعقادی، از غدد بزاقی زالو ترشح می شود. این دارو، مهارکننده بسیار قوی ترومبین می باشد بنابراین می تواند رقیبی برای هپارین نیز باشد. هدف از این مطالعه، الحاق توالی سیگنال پپتید pelB (توالی سیگنال پپتید pelB روی سکانس پلاسمید pET-22b تعبیه شده است) و بررسی بیان پروتئین نوترکیب هیرودین در اشرشیاکلی می باشد.مواد و روش ها
ترادف 66 آمینواسیدی واریانت HV3 ژن هیرودین تهیه و به داخل یک وکتور بیانی قوی (pET-22b) انتقال داده شد. برای تسهیل در تخلیص پروتئین از His-tag در ناحیه N-ترمینال ژن استفاده گردید. سیگنال پپتید pelB در ابتدای ژن با هدف ترشح به فضای پری پلاسمیک و محیط کشت درج شد و ساختار پلاسمیدی حاصله توسط سویه OrigamiB (DE3) باکتری E.coli بیان شد. در نهایت میزان بیان پروتئین تولیدی در ناحیه سیتوپلاسم، فضای پری پلاسمی و محیط کشت مقایسه گردید.یافته ها
نتایج به دست آمده نشان می دهد که مقدار پروتئین بیشتری در فضای پری پلاسمیک بیان شده و مقدار کمی پروتئین نیز به محیط کشت ترشح گردیده است.استنتاج
با به کارگرفتن وکتورهایی که قادر به انتقال پروتئین هدف به فضای پری پلاسمیک، که محیطی بسیار مطلوب برای شکل گیری باندهای دی سولفید و فلدینگ صحیح پروتئین هدف هستند، احتمال تشکیل اینکلوژن بادی ها کاهش یافته و تولید پروتئین های محلول و فعال افزایش می یابد.کلیدواژگان:
زبان:
فارسی
انتشار در:
صفحات:
72 تا 82
لینک کوتاه:
magiran.com/p1349591
دانلود و مطالعه متن این مقاله با یکی از روشهای زیر امکان پذیر است:
اشتراک شخصی
با عضویت و پرداخت آنلاین حق اشتراک یکساله به مبلغ 1,390,000ريال میتوانید 70 عنوان مطلب دانلود کنید!
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی نامحدود همه کاربران به متن مطالب تهیه نمایند!
توجه!
- حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران میشود.
- پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانههای چاپی و دیجیتال را به کاربر نمیدهد.
In order to view content subscription is required
Personal subscription
Subscribe magiran.com for 70 € euros via PayPal and download 70 articles during a year.
Organization subscription
Please contact us to subscribe your university or library for unlimited access!