Toward the development of a single-round infection assay based on EGFP reporting for anti-HIV-1 drug discovery
Message:
Abstract:
Background
The rapid increase of HIV-1 strains resistant to current antiretroviral drugs is a challenge for successful AIDS therapy. This necessitates the development of novel drugs, and to this end, availability of screening systems for in vitro drug discovery is a priority. Herein, we report the modification of a previously developed system for increased sensitivity, ease of use, and cost-efficiency, based on the application of the EGFP marker.
Methods
A PCR-amplified gfp gene (gfp) was cloned into pmzNL4-3, the plasmid already designed to produce single-cycle replicable virions, in frame with the reverse-transcriptase gene to construct the pmzNL4-3/GFP plasmid. GFP-mzNL4-3 pseudo-typed virions, as the first progeny viruses, were recovered from the culture supernatant of HEK293T cells co-transfected with pmzNL4-3/GFP and the helper plasmids pSPAX2 and pMD2G, which respectively encode HIV-1 Gag-Pol and vesicular stomatitis virus glycoprotein. Single-cycle replication and virion production were assessed by syncytia formation, p24 antigen assays, and electron and fluorescence microscopy.
Results
The incorporation of EGFP into the viral particles allowed their quantification by fluorometry, flow-cytometry, and fluorescence microscopy; however, this modification did not affect the single-round infectivity or production rate of the GFP fluorescence-emitting virions.
Conclusions
Our results certify the development of a rapid, inexpensive, and safe GFP-reporting single-cycle replicable system for anti-HIV drug discovery. Further experiments are needed to measure the validity and robustness of the assay.
Language:
English
Published:
Reports of Biochemistry & Molecular Biology, Volume:4 Issue: 1, 2015
Page:
1
magiran.com/p1402382  
برخی از خدمات از جمله دانلود متن مقالات تنها به مشترکان مگیران ارایه می‌گردد. شما می‌توانید به یکی از روش‌های زیر مشترک شوید:
اشتراک شخصی
در سایت عضو شوید و هزینه اشتراک یک‌ساله سایت به مبلغ 400,000ريال را پرداخت کنید. همزمان با برقراری دوره اشتراک بسته دانلود 100 مطلب نیز برای شما فعال خواهد شد!
امکان پرداخت با کارتهای اعتباری بین المللی از طریق PayPal امکانپذیر است.
اشتراک سازمانی
به کتابخانه دانشگاه یا محل کار خود پیشنهاد کنید تا اشتراک سازمانی این پایگاه را برای دسترسی همه کاربران به متن مطالب خریداری نمایند!
توجه!
  • دسترسی به متن مقالات این پایگاه در قالب ارایه خدمات کتابخانه دیجیتال و با دریافت حق عضویت صورت می‌گیرد و مگیران بهایی برای هر مقاله تعیین نکرده و وجهی بابت آن دریافت نمی‌کند.
  • حق عضویت دریافتی صرف حمایت از نشریات عضو و نگهداری، تکمیل و توسعه مگیران می‌شود.
  • پرداخت حق اشتراک و دانلود مقالات اجازه بازنشر آن در سایر رسانه‌های چاپی و دیجیتال را به کاربر نمی‌دهد.