شناسایی مولکولی گونه های تیلریا و ناقلین آن در گاوهای شهرستان یزد با روش Semi-nested PCR

تیلریوز یکی از بیماری های تک یاخته ای خونی در گاو بوده که سبب مرگ و میر بالا می شود. تاکنون مطالعات میکروسکوپی زیادی درباره شناسایی گونه های آلوده کننده تیلریا در گاو و کنه های ناقل صورت گرفته که در مقایسه با روش های مولکولی از حساسیت و ویژگی کمی برخوردارند.
دراین مطالعه سعی شدگونه های تیلریاوناقلین آن درگاوهای شهرستان یزدباروشSemi-nested PCR موردشناسایی قرارگیرند.
طی ماه های خرداد تا شهریور سال 1391، تعداد 100 نمونه خون EDTA به همراه گسترش های نازک خون ازگاوهای شیری نژاد هلشتاین مشکوک به تیلزیوز بدون سابقه واکسیناسیون بر علیه بیماری تهیه گردید. همزمان با بازرسی بدن گاوها تعداد 249 عدد کنه جمع آوری شدندگسترش تهیه شده با گیمسا رنگ آمیزی شدندو DNA از نمونه های خون با استفاده از کیت تجاری استخراج گردیدند. کنه ها همچنین با استفاده از کلید های تشخیص شناسایی و بر اساس جنس و گونه کنه به 50 مجموعه 5 کنه ای تقسیم شدند و با استفاده از لوپ و وسایل حشره شناسی غدد بزاقی آنها جدا سازی و DNA آنها نیز استخراج گردید. نمونه های DNA استخراج شده با آنSemi-nested PCR بر روی ژن18S rRNA، مورد آزمایش قرار گرفتند. جهت تشخیص تیلریا لستوکاردی و تفریق آن از تیلریا آنولاتا در نمونه های کنه از روش PCR-RFLP استفاه شد.
در بررسی اولیه انجام شده با میکروسکوپ نوری، در 4 گسترش خونی (4%) اشکال حلقوی انگل مشاهده گردید. همچنین همه کنه های جمع آوری شده هیالوما آناتولیکوم آناتولیکوم تشخیص داده شدند. نتایج به دست آمده با روش Semi-nested PCR، نشان دهنده آلودگی 11 نمونه خون (11%) و سه مجموعه غدد بزاقی کنه به تک یاخته تیلریا آنولاتا بودند. هیچ یک از نمونه ها آلوده به تیلریا اورینتالیس نبودند. مطالعات تکمیلی با PCR-RFLP با استفاده از آنزیم MspI نیز نشان داد که نمونه های کنه ها همگی از نظر آلودگی به تیلریا لستوکاردی منفی می باشند.
نتیجه گیری نهایی: بر پایه نتایج بدست آمده تیلریا آنولاتا و کنه هیالوما آناتولیکوم آناتولیکوم عامل و ناقل مهم تیلریوز گرمسیری در شهرستان یزد می باشند.