تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه SN4 در اشریشیاکلی

ال- آسپاراژیناز جایگاه با ارزشی از جنبه کاربردهای پزشکی و صنایع غذایی دارد. تقاضا برای این آنزیم دارویی هرساله چندین برابر می شود.
در این پژوهش، یک آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه SN4، تعیین توالی و در اشریشیاکلی کلون شد. پرایمر ها بر اساس آل- آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه DSM50071 طراحی شدند که بر اساس توالی ژن 16S rRNA شباهت بالایی را نسبت به سویه SN4 نشان می داد. ژن آسپاراژیناز در معرض هضم آنزیمی توسط آنزیم های برشی NdeI و XhoI قرار گرفت و سپس، به داخل پلاسمید pET21a الحاق شد. محصول الحاق به درون سلول های مستعد E. coli (DE3) pLysS DH5a با روش CaCl2 ترانسفورم شد. سلول های
E. coli ترانسفورم شده در محیط LB آگار حاوی 100 میکروگرم/ میلی لیتر آمپیسیلین و IPTG (1mM) رشد داده شدند.
ال- آسپاراژیناز نوترکیب در باکتری BL21 E. coli پس از 9 ساعت انکوباسیون، به میزان بالایی القا شد و فعالیت آسپاراژینازی بالایی به میزان 4/93 واحد در میلی لیتر را نشان داد. ال- آسپاراژیناز نوترکیب تعیین توالی شد و نتایج همردیفی نشان داد که توالی پیشنهادی اسید آمینه ایی آن از 350 اسید آمینه تشکیل شده که شباهت بالایی با
ال- آسپاراژیناز های سایر سودوموناس ایروجینوز ها در حدود 99 درصد را نشان می دهد. نتایج نشان می دهد که آل- آسپاراژیناز SN4، باقی مانده های کاتالیزی و نواحی حفظ شده مشابه با سایر آسپاراژینازها را داراست.
پژوهش حاضر نخستین گزارش در مورد کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آایروجینوزا در اشریشیاکلی است که منبع بالقوه ایی از ال- آسپاراژیناز را برای بررسی اثر ضدسرطانی آن هم در شرایط آزمایشگاه و هم در موجود زنده فراهم می کند.