همسانه سازی، انتقال و بیان دائم فیوژن ژن های اینترفرون گامای انسانی و bar در گیاه توتون

تولید پروتئین اینترفرون گامای انسانی در سیستم های بیانی یوکاریوتی، به عنوان یک پروتئین نوترکیب درمانی، در مطالعات پزشکی اهمیت بسیاری دارد. ویژگی های اینترفرون گاما، آن را به یک فاکتور ضد سرطانی مناسب تبدیل کرده است. فسفینوتریسین (PPT) مهارکننده گلوتامین سینتاز است و از گروه علف کش های غیرانتخابی بیالافوس می باشد. ژن bar کد کننده آنزیم فسفینوتریسین استیل ترانسفراز (PAT) است. این آنزیم باعث ایجاد مقاومت به علف کش فسفینوتریسین می شود و می تواند به عنوان یک نشانگر انتخابی در گیاهان استفاده شود. در این پژوهش، ژن اینترفرون گامای انسانی و ژن bar به صورت فیوژن در ناقل بیانی گیاهی pCAMBIA 1305.1 تحت کنترل پیش برنده CaMV35S و خاتمه دهنده NoS همسانه سازی شد. صحت همسانه سازی فیوژن IFNγ- Barدر ناقل بیانی حاضر با استفاده از تکنیک های مختلفColony PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. سازه ی تهیه شده (pCAMBIA1305.1- IFNγ- Bar) با استفاده از روش انجماد و ذوب به اگروباکتریوم سویه ی LBA4404 انتقال داده شد و با استفاده از روش دیسک برگی در ژنوم گیاه توتون ادغام شد. گیاهان تراریخته احتمالی در محیط گزینشگر، حاوی 30 میلی گرم در لیتر هیگرومایسین انتخاب شدند. پس از ریشه دار شدن به خاک انتقال یافتند و حضور فیوژن IFNγ- Barدر ژنوم این گیاهان با استفاده از تکنیک PCR تایید شد. در آنالیز دات بلات نیز حضور پروتئینIFNγ-bar در گیاهان تراریخت توتون تایید شد.