همسانه سازی و انتقال آنزیم T7RNA پلیمراز باکتریوفاژ T7 به توتون

کشاورزی مولکولی به تولید پروتئین های دارویی و آنزیم های صنعتی توسط گیاهان از طریق مهندسی ژنتیک اطلاق می شود. آنزیم T7RNA پلیمراز یکی از مهمترین آنزیم هاست که به طور وسیعی در زمینه های مختلف بیوتکنولوژی و زیست شناسی سلولی و مولکولی، از قبیل سنتز و مطالعه ساختار و عملکرد RNA ها در شرایط آزمایشگاهی استفاده می شود. RNAهای سنتز شده در شرایط آزمایشگاهی در هیبریداسیون، ریزآرایه، آزمایشات RNAiو RNAآنتی سنس کاربرد دارد. این آنزیم همچنین در سیستم های بیانی وابسته به پیشبر و خاتمه دهنده T7 کاربرد فراوان دارد. آنزیم T7RNA پلیمراز یک آنزیم باکتریوفاژی بوده و فعالیت اصلی آن در سیتوپلاسم می باشد. تحقیق حاضر جهت همسانه سازی، انتقال ژن آنزیم T7RNA پلیمراز به هسته سلولهای یوکاریوتی و تولید آن در گیاه توتون انجام گرفت. آغازگرهای مناسب از روی توالی ژن T7RNA پلیمراز به همراه توالی های مناسب برای آنزیم های برشی، طراحی و ژن T7RNA پلیمراز مورد نظر پس از جداسازی در ناقل بیانیpCAMBIA1304 همسانه سازی شد. به منظور اطمینان از همسانه سازی، سازه تهیه شده با استفاده از PCR، هضم آنزیمی و توالی یابی بررسی شده و همردیفی آن در بانک اطلاعاتی اسیدهای نوکلئیک تایید گردید. سپس، سازه نوترکیب به کمک سویه LB4404 آگروباکتریوم به گیاهان توتون منتقل و گیاهان تراریخته بر روی محیط های کشت انتخابی حاوی آنتی بیوتیک های هیگرومایسین و سفوتاکسیم، باززا شدند. حضور و بیان ژن T7RNA پلیمراز در گیاهان تراریخته با روش های PCR وRT- PCR تایید شد.