جداسازی و تعیین خصوصیات اگزوزوم های جدا شده از سلول های بنیادی مزانشیم با استفاده از روش اولترا سانتریفیوژ

در سال های اخیر عملکردهای سلول های بنیادی مزانشیم در مرکز توجه قرار گرفته است. شواهد نشان می دهد سلول های بنیادی مزانشیم به شیوه ای پاراکرین عمل می کنند؛ بنابراین، عوامل بیولوژیکی از جمله اگزوزوم ها و عوامل محلول در آب، در محیط کشت سلول ها وجود دارند که می توانند عملکردی مشابه سلول های بنیادی مزانشیم داشته باشند. بنابراین جداسازی اگزوزوم ها از سلول های بنیادی مزانشیم و تعیین خصوصیت آن ها و تاییدشان می تواند جهت پیشبرد اهداف درمانی در بیماری هایی همانند بیماری های خود ایمن و سرطان مورد استفاده قرار گیرد. استفاده از اگزوزوم های جداشده از سوپ و مایع رویی کشت سلول های بنیادی مزانشیمی خطرات و مشکلات سلول درمانی را ندارد و همچنین کارایی بیشتری نسبت به مایع رویی کشت سلول دارد.
در این مطالعه تجربی از بافت چربی، سلول های بنیادی مزانشیم استخراج شده است و پس از تعیین هویت سلول های بنیادی مزانشیم، از سوپ سلولی سلول های بنیادی مزانشیم با استفاده از روش سانتریفیوژ تفریقی اگزوزوم ها جداسازی گردید. غلظت اگزوزوم ها با روش بردفورد تعیین و همچنین خصوصیات کیفی آن ها توسط میکروسکوپ الکترونی و دستگاه تفریقی نور تعیین شد.
بعد از کشت و پاساژ سلول های بنیادی مزانشیم،سوپ سلولی بعد از 48 ساعت جمع آوری شده و با استفاده از سانتریفیوژ تفریقی با دور g60000 اگزوزوم های آن با اندازه ی تقریبا 40 تا 100 نانو متر جدا گردید. میانگین غلظت آن mg/ml 630 بوده و در تصاویر میکروسکوپ الکترونی تمامیت غشا اگزوزوم هاطی فرایند جداسازی حفظ شده است و ساختار کروی دچار آسیب نشده است. نتایج آنالیز دستگاه تفریقی نور نشان می دهد که تقریبا 70 درصد ذرات دارای میانگین قطر 90-50 نانو متر و هستند.
در مقایسه دو روش جداسازی g 100000 و g60000 در نتایج به دست آمده در پژوهش های دیگر ذرات اگزوزوم در دورg 10000خالص تر می باشند ولی در دورg 60000 ممکن است ذرات بزرگ تری از اگزوزوم مانند میکرووزیکول ها دیده شوند ولی در نهایت به علت دسترسی کمتر به اولترا سانتریفیوژ با دور g100000 ، جداسازی با دور پایین تر هم کاربردی می باشد.همچنین جداسازی اگزوزوم های مشتق از سلول های بنیادی مزانشیم و تولید انبوه آن احتمالا می تواند به عنوان یک محصول زیست ایمن در درمان بیماری ها مورد توجه قرار گیرد.