ارزیابی و مقایسه تیتر آنتی بادی علیه پروتئین های نوترکیب منفرد، مخلوط و کایمر CTXB، TCPA وTCPA CTXB-

وبا به عنوان بیماری اسهالی یکی از مهم ترین علل مرگ و ناتوانی در افراد جوامع مختلف به شمار می رود. فاکتور کلونیزاسیون پیلی tcpA و توکسین کلرا مهم ترین فاکتورهای بیماری زایی ویبریوکلرا می باشند. زیر واحد B سم کلرا (ctxB) و tcpA توانایی القای پاسخ های ایمنی را دارند. هدف از این مطالعه، تولید پروتئین های نوترکیب CTXB ، TCPA و CTXB-TCPA و مطالعه ایمنی زایی و مقایسه تیتر آنتی بادی کایمر، مخلوط و جداگانه پروتئین ها ی نوترکیب در موش بود.
در این مطالعه تجربی، ژن هایctxB ،tcpA و کایمر ctxB-tcpA در وکتورهای بیانی (+) pET28a و (+) pET32a همسانه سازی و پلاسیمدهای نوترکیب به coli BL21 DE3. E منتقل شدند. بیان پروتئین های نوترکیب با IPTG القا و با روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA استفاده شد. ایمن سازی موش ها به روش درون صفاقی و زیر پوستی انجام شد. تیتر آنتی بادی در سرم موش های ایمن شده با روش الایزا مورد ارزیابی قرار گرفت.
آنالیز SDS PAGE و وسترن بلاتینگ، بیان و تخلیص پروتئین های نوترکیب را تائید کرد. میزان پروتئین های خالص شده CTXB، TCPA و CTXB-TCPA به ترتیب 570/15، 533/11 و 100/33 میلی گرم در لیتر بود. نتایج الایزا نشان داد که ایمنی زایی موش ها به خوبی صورت پذیرفته است. تفاوت معنی داری در تیتر آنتی بادی علیه آنتی ژن ها ی CTXB-TCPA و مخلوط TCPA با CTXB وجود نداشت. همچنین تفاوت معنی داری در تیتر آنتی بادی حاصل از تزریق درون صفاقی و زیرپوستی مشاهده نشد.
اختلاف جزئی در تیتر آنتی بادی پروتئین ها ممکن است به طول عمر سلول های خاطره حاصله در این گروه ها و همچنین روش تزریقی آن ها ارتباط داشته باشد. با توجه به مزیت های پروتئین های کایمر، CTXB-TCPA می تواند جایگزین مناسبی برای مخلوط پروتئین ها جهت تحریک سیستم ایمنی باشد.