کشت بافت تخمدان ماهی طلایی Carassius auratus

در این تحقیق کشت اولیه وکشت های مجدد اول و دوم (ساب کالچر اول و ساب کالچر دوم) بافت تخمدان ماهی طلایی Carassius auratus به منظور ایجاد یک مدل آزمایشگاهی از سلول های تخمدان این گونه انجام شد. یک عدد ماهی قرمز به وزن 42 گرم و طول 7 سانتیمتر با پودر گل میخک (0. 2g/lit) بی هوش شد و تخمدان آن از بدن خارج و در یک ظرف پتری حاوی 5 میلی لیتر محیط کشت L-15، استرپتومایسین سولفات (200ug/ml) ، پنی سیلین پتاسیم جی (200iu/ml) و آمفوتریسین (5ug/ml) B منتقل شد. تخمک ها که در مرحله پیشرفته رسیدگی (مرحله IV) بودند از تخمدان جدا شدند و تخمدان به وسیله یک سرنگ 5 میلی لیتری به تکه های کوچک تر تبدیل شد. تکه های کوچک بافت تخمدان در 5 میلی لیتر محیط کشت 15%، L-15 سرم گوساله جنینی (FBS) ، استرپتومایسین سولفات (100ug/ml) ، پنی سیلین پتاسیم جی (100iu/ml) و آمفوتریسین (2. 5ug/ml) B تحت دمای 25 درجه سانتیگراد کشت داده شدند. بعد از گذشت دو هفته و تشکیل مقدار کافی لایه سلولی بر روی کف فلاسک کشت، سلول ها با محلول PBS حاوی آنتی بیوتیک ها شستشو شدند، از کف فلاسک کشت سلول از طریق تیمار با Trypsin-EDTA (%25/.) جدا گردیدند و مجددا در 5 میلی لیتر محیط کشت 15% ، L-15 سرم گوساله جنینی (FBS) ، استرپتومایسین سولفات (100ug/ml) ، پنی سیلین پتاسیم جی (100ug/ml) و آمفوتریسین (2. 5 ug/ml) B تحت دمای 25 درجه سانتیگراد کشت داده شدند. پس از تشکیل مقدار کافی لایه سلولی بر روی کف فلاسک کشت، در روز پانزدهم همین مراحل برای انجام ساب کالچردوم نیز تکرار شد. سلول های حاصل از کشت اولیه و ساب کالچرهای اول و دوم بافت تخمدان ماهی قرمز همگی سلول های شبه فیبروبلاست (Fibroblast-like) بودند.