همسانه سازی، بررسی بیان و تخلیص ژن کد کننده پروتئین نوترکیب متشکل از زیرواحدهای اتصالی آنتی ژن های سطحی CS1 و CS2 از اشرشیا کلی انتروتوکسیژنیک (ETEC)

باکتری اشرشیا کلی انتروتوکسیژنیک از عوامل شایع اسهال است. فاکتورهای کلونیزاسیون و انتروتوکسین ها از عوامل اصلی حدت زا در این ارگانیسم هستند. باکتری مذکور از طریق فاکتورهای کلونیزاسیون به سطح سلول های اپیتلیال روده متصل می شود و انتروتوکسین ها را تولید می کند که این سموم باعث ترشح بیش ازحد مایعات و الکترولیت ها در لومن روده می شوند که درنهایت منجر به اسهال می گردند. به دلیل درمان مشکل و شیوع بالای این بیماری طراحی واکسن علیه این ارگانیسم یکی از اهداف سازمان بهداشت جهانی است. پروتئین CooD – CotD به عنوان زیر واحدهای راسی CS1 و CS2 نقش مهمی را در اتصال باکتری به سلول های اپیتلیال روده ایفا می کنند. در این مطالعه بیان و تخلیص ژن کد کننده پروتئین کایمریک CooD – CotD به عنوان کاندیدای واکسن های زیرواحدی انجام شد. در این مطالعه ، بهینه سازی کدونی ژن کایمریک cooD – cotD با نرم افزار Gene Designer انجام شد. ژن موردنظر با روش PCR تکثیر و در وکتور کلونینگpJET1.2/blunt همسانه سازی گردید و به منظور بیان در وکتور بیانیpET28a زیرهمسانه سازی شد. پروتئین با روش کروماتوگرافی نیکل تخلیص و با وسترن بلات ارزیابی شد. حضور باند 82 کیلودالتونی در ژل SDS-PAGE 10 درصد بیان پروتئین کایمریک CooD – CotD را نشان داد که با روش وسترن بلات تایید گردید. میزان پروتئین تخلیص شده در این تحقیق 121 میکروگرم در میلی لیتر بود. مطالعات بیان و تخلیص پروتئین نشان داد که این پروتئین دارای بیان در میزبان همولوگ است.