مکان یابی رونوشت ژن Vasa در بافت بیضه ماهی آزاد دریای خزر (Salmo caspius) با شیوه دورگه سازی در محل (In Situ Hybridization)

دورگه سازی در محل، ابزار قدرتمندی در مکان یابی توالی خاصی از اسید های نوکلئیک در جمعیت ناهمگونی از سلول ها است. از این رو، مطالعه حاضر با هدف راه انداری این شیوه، با استفاده از نشانگر Vasa در بافت بیضه ماهی آزاد دریای خزر (Salmo caspius) انجام شد. برای انجام این مطالعه، ریبوپروب نشاندار شده با دیگوکسی ژنین (Dig) از پلازمید pGEM-T حامل DNA مکمل ژن Vasa ماهی آزاد دریای خزر، تولید شد. نشاندار کردن RNA طی واکنش رونویسی در شرایط آزمایشگاهی با استفاده از Dig Labeling Mix انجام شد. برای دورگه سازی در محل بر روی بافت، ابتدا بافت بیضه بعد از جداسازی از ماهی آزاد نابالغ، تحت تثبیت و آب گیری بافتی قرار گرفت. پس از آب دهی مجدد و تیمار با پروتئیناز K، لام ها با بافر دورگه سازی، حاوی ریبوپروب آنتی سنس Vasa انکوبه شدند. پس از شستشو با محلول SSC و انکوباسیون با آنتی بادی علیه دیگوکسی ژنین برای 16 ساعت، آشکارسازی با NBT/BCIP انجام شد. نتایج به دست آمده از این پژوهش با استفاده از ریبوپروب آنتی سنس Vasa نشان داد که همه سلول های زایا (از سلول های بنیادی اسپرماتوگونی تا اسپرماتوزوآ) این ژن را به خوبی بیان کردند، اما شدت بیان آن در رده های مختلف سلول های زایای گونه مورد مطالعه، متفاوت بود. بنابراین در این مطالعه، ژن Vasa به عنوان نشانگر اختصاصی برای سلول های زایا در این ماهی و شیوه دورگه سازی در محل به عنوان یک عامل کاوشگر، به منظور بررسی مکان رونوشت ژن ها در بافت بیضه ماهی آزاد، معرفی شد. این یافته می تواند کمک شایانی در شناخت بیشتر ما از چگونگی تشکیل سلول های زایا و تکوین آن ها در این گونه ارزشمند دریای خزر داشته باشد.