بهینه سازی انجماد شیشه ای تخمک گوسفندی از طریق کاهش کلسیم با افزودن EGTA به محلول انجمادی

در فرآیند انجماد شیشه ای، کلسیم داخل سلولی تحت تاثیر مواد محافظ انجماد افزایش و توانایی تکوین تخمک کاهش می یابد. مطالعه حاضر با هدف کاهش کلسیم محیط پایه انجماد به منظور بهبود میزان لقاح و توانایی تکوین تخمک انجام شد.

مواد و روش ها:

 مجموعه تخمک و سلول های کومولوسی از تخمدان گوسفند جمع آوری و پس از 24 ساعت کشت در محیط بلوغ، تخمک های متافاز II به پنج گروه شامل یک گروه کنترل (غیرانجمادی) و چهار گروه انجمادی تقسیم شدند. گروه های انجمادی براساس حضور یا عدم حضور اتیلن گلیکول تترااستیک اسید (EGTA) و کلسیم در محیط پایه طراحی شدند. به این منظور از چهار نوع محیط پایه شامل فسفات بافرسالین با و بدون کلسیم، همچنین فسفات بافرسالین دارای EGTA، با و بدون کلسیم استفاده شد. پس از ذوب، میزان لقاح و تکوین جنین تا تشکیل بلاستوسیست اندازه گیری شد. کیفیت بلاستوسیست با استفاده از رنگ آمیزی افتراقی و تجزیه و تحلیل آماری داده ها با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه انجام شد.

یافته ها:

 بین گروه های انجمادی از لحاظ میزان زنده مانی تفاوت معنی داری وجود نداشت. میزان لقاح در محیط فاقد کلسیم بالاتر از سایر گروه های انجمادی (0/55±68/81 و 0/67±67/77، به ترتیب در حضور و عدم حضور EGTA) بود. در محیط فاقد کلسیم و حاوی EGTA تکوین جنین 3 و 5روزه، به ترتیب 1/38±53/65 و 2/85±46/21 نسبت به سایر گروه های انجمادی بالاتر بود (0/05<p). شمارش سلولی بلاستوسیست تفاوت معنی داری بین گروه های انجمادی و گروه کنترل نشان نداد.

استفاده از سیستم انجمادی بدون کلسیم از طریق افزودن EGTA می تواند سبب بهبود کیفیت تخمک بالغ گوسفندی پس از انجماد و بهبود تکوین جنین های حاصل شود.