کلونینگ، بیان و تخلیص دومین BRICHOS حاصل از Bri2 و خاصیت ضد تجمعی آن

رسوب پروتیینها در اثر فرآیند تجمعدر درون یا بیرون سلول ها باعث ایجاد بسیاری از بیماری هایعصبی نظیر آلزایمر، تشنج هانتینگتون یا پارکینسون میشود. بیماری پارکینسون پس از آلزایمر دومین بیماری شایععصبی است که طی آن در اثر تجمع اجسام لوی  و تخریب نورون های دوپامین اختلالات حرکتی در بیماران به وجود می آید. پروتیین آلفا سینوکلیین  حاوی 140 اسید آمینه، اصلی ترین پروتیین شناخته شده در تجمعات اجسام لوی است. طی فرآیند تجمع، مونومرهای پروتیینی آلفا سینوکلیینبصورت الیگومر به هم متصل شده و در نهایت بصورت رشته های آمیلوییدی در می آیند. تاکنون دارویی برای توقف یا به تاخیر انداختن پیشرفت پارکینسون وجود نداشته اما مطالعات بر مکانیسم مولکولی تشکیل آمیلوییدها و شناسایی مهار کننده های آن در حال افزایش است. بدین منظور در این تحقیق تاثیر دمین BRICHOSحاصل از BRI2 که می تواند وظایف مختلفی از جمله خاصیت ضد تجمعی داشته باشد بر فرایند تجمع آلفا سینوکلیینبه عنوان پروتیین مدل بررسی گردید. ژن مورد نظر ابتدا بهینه و سنتز گردید و سپس توسط PCR تکثیر گردید. محصول توسط آنزیم های   Xho I و Nde1هضم آنزیمی شده و وارد وکتور بیانی pET28a گردید که به باکتری E.Coli ترانسفورم شد. در آخر پپتید مورد نظر با کروماتوگرافی نیکل سفارز تخلیص شد. ژن آلفا سینوکلیین  نیزبه صورت مجزا بیان و تخلیص گردید. اثر ضد تجمعی دمین BRICHOS بر فیبریلاسیون آلفا سینوکلیین با استفاده از روش فلورسانس تیوفلاوین Tو تکنیک TEMبررسیشد.