کلون سازی فاکتور رشد اکتیوین A انسانی و بررسی تاثیر بیان همزمان چپرونهای سیتوپلاسمی با آن

اکتیوین A یکی از اعضای خانواده ی فاکتور رشد تغییردهنده ی بتا (TGF-β) است که نقش مهمی در فرآیندهای فیزیولوژیکی متعدد همانند تمایز سلولی، ترمیم بافتی، رگ زایی، تمایز سلول های بنیادی، چسبندگی سلولی و آپوپتوز دارد. لذا با توجه به کاربردهای بالینی متعدد این پروتیین، تولید نوترکیب آن سودمند می باشد.از آنجاییکه اشرشیاکلی یکی از محبوب ترین میزبان ها برای تولید پروتیین های نوترکیب است، در این تحقیق از بیان سیتوپلاسمی در این سویه به منظور تولید مقادیر بالایی از اکتیوین A استفاده گردید. بدین منظورابتدا cDNA ناحیه ی بالغ ژن اکتیوین A  تکثیر و در وکتور (+)pET28a  کلون گردید. وکتور حاصل به سویه‎های (DE3)BL21،  plysS (DE3) BL21 و  Rosetta gami (DE3) BL21 انتقال داده شد. پس از القای پروموتر با استفاده از IPTG و بیان پروتیین، تولید  اکتیوین A  به وسیله ی روش های SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. نتایج نشان داد که بیان اکتیوین A در سیتوپلاسم هر سه سویه یک رویکرد موثر برای دست یابی به میزان بالایی از پروتیین نوترکیب است اما در این بین، سویه (DE3)BL21 مقدار بیشتری پروتیین تولید کرده است. در مرحله ی بعد به منظور دست یابی به شکل محلول اکتیوین A از بیان همزمان چپرون های سیتوپلاسمی TF، GroEL/ES و DnaK/J  با وکتور (+) pET28a که حامل اکتیوینA  بود استفاده شد. نتایج SDS-PAGE و وسترن بلات نشان داد که بیان همزمان اکتیوین A با استفاده از پلاسمید چپرونی pGro7 که دارای چپرون های GroEL و GroES می باشد، در سویه ی(DE3)BL21 یک رویکرد موثر برای تولید پروتیین اکتیوین A محلول است.