طراحی، کلونینگ و بیان ژن ctxB-tcpA-c-cpe در اشریشیا کلی به عنوان کاندیدای واکسن وبا

 پیلی و زیر واحد B توکسین مهمترین عوامل بیماری زایی ویبریو کلرا می باشند. در این پژوهش، از پایانه C توکسین کلاستریدیوم پرفرینجنس به عنوان یک سیستم تحویل استفاده گردید و با ایجاد کایمرای TcpA-CtxB پروتین حاصل در باکتری اشریشیا کلی بیان شد.

به صورت تجربی، توانایی سازه دارای CtxB-TcpA-CPE در مقایسه با توالی های پروتینی کامل هر یک از پروتین های CtxB، TcpA و C-CPE مورد مطالعه قرار گرفت. تکثیر قطعات ژنی با استفاده از PCR و سپس کلونسازی در وکتورهای بیانی انجام شد. به منظور ساخت سازه، پروتین کایمرای هدف با استفاده از لینکر طراحی و به روش سنتتیک تولید شد. پس از تولید، پروتین ها تخلیص و سپس با روش ایمونوبلات مورد تایید قرار گرفتند.

پروتین کایمرا تولید شده 484 اسیدامینه داشت. این تعداد آمینواسید میتواند نشان دهنده پایداری پروتین باشد. ژن c-cpe، ژن tcpA و ژن ctxB به ترتیب دارای اندازههای 381،375 و 675 جفت باز بودند. نتایج هضم آنزیمی و تعیین توالی نشان دهنده ی همولوژی نوکلیوتیدی محصولات بدست آمده با توالی ژن های ثبت شده در NCBI بود. این ژن ها به طور موفقیت آمیزی در میزبان اشریشیا کلی وارد و اندازه باند پروتینی آن ها در SDS-PAGE به ترتیب، 15، 25، 25 و 52 کیلودالتون بود.

براساس مطالعات فیزیکوشیمیایی صورت گرفته، به نظر می رسد که این پروتین نوترکیب کاندیدای خوبی برای بررسی به عنوان واکسن خوراکی ویبریو کلرا باشد که البته برای اثبات این فرضیه به انجام آزمون های چالشی و مطالعات تکمیلی بیشتری نیاز دارد.