ویرایش ژن MALAT1 در رده سلولی سرطان سینه MDA-MB-361 با روش نوین کریسپر

RNAهای غیرکدکننده بلند به طور فعال نقش مهمی در تنظیم بیان ژن، پردازش RNA، اصلاح هیستون و بازآرایی ژن های کروماتین ایفا می کنند؛ همچنین این مولکول ها می توانند در فرایند های زیست شناختی متنوع ازجمله اندام زایی، تمایز سلولی، نمو طبیعی، نقش پذیری ژنوم، جبران مقدار و روند تومورزایی دخیل باشند. بیان بالای MALAT1 (نوعی lncRNA) در بسیاری از سرطان ها، ازجمله سرطان سینه نشان می دهد که اختلال تنظیم MALAT1 در رشد بسیاری از انواع سرطان ها عامل مهمی به شمار می رود. سرطان سینه شایع ترین سرطان در میان زنان در سراسر جهان است و تهاجم و متاستاز این بیماری از علل اصلی مرگ ومیر مرتبط با آن است. هدف از مطالعه حاضر، حذف ژن MALAT1 در رده سلولی MDA-MB-361 سرطان سینه و ارزیابی عملکرد و تاثیرات آن روی بیان ژن های مرتبط با آپوپتوز است.

در این مطالعه، دو نوع sgRNA توسط نرم افزار CHOPCHOP برای اگزون شماره 1 ژن MALAT1 طراحی شد. این sgRNAها در دو وکتور کریسپری به صورت جداگانه کلون گردیدند تا وکتورهای نوترکیب PX459-sgRNA1 و PX459-sgRNA2 به وجود آیند. انتقال همزمان این دو وکتور به رده سلول های سرطانی MDA-MB-361 با استفاده از لیپوفکتامین 2000 صورت گرفت. ویرایش ژن MALAT1 در سلول های دریافت کننده وکتورهای کریسپری بررسی شد. میزان بیان ژن های مرتبط با آپوپتوز به روش real time PCR آنالیز گردید. میزان تکثیر سلولی و آپوپتوز به ترتیب با روش های MTT و فلوسیتومتری ارزیابی شد.

ویرایش ژن MALAT1 به روش کریسپر در سلول های MDA-MB-361 صورت گرفت. میزان تکثیر سلولی در سلول های گروه تیمار نسبت به گروه های کنترل، کاهش معنی داری نشان داد (P˂0.05). سطح آپوپتوز در سلول های سرطانی که ژن MALAT1 آن ها حذف گردیده است، با افزایش چشمگیری همراه بود؛ همچنین بیان ژن های آنتی آپوپتوزی BCL2 و survivin در سلول های تحت تیمار (ویرایش شده) نسبت به سلول های گروه کنترل، به صورت معنا داری کاهش یافت (P˂0.05). افزایش بیان ژن های پروآپوپتوزی P53، BAK، BAX و FAS نیز در سلول های ویرایش شده مشاهده گردید (P˂0.05).

 نتایج این مطالعه تایید می کند که حذف ژن MALAT1 در افزایش آپوپتوز و کاهش تکثیر سلولی تاثیر بسزایی دارد و کاهش بیان ژن MALAT1 می تواند از رشد و تکثیر رده سلول سرطان سینه جلوگیری کند؛ بنابراین، به نظر می رسد کنترل بیان انکوژن MALAT1 برای کنترل تومورها مفید و موثر است.