تاثیر بیان هم زمان چپرون های سیتوپلاسمی بر بیان فاکتور رشد عصبی نوترکیب در میزبان بیانی E. coli

فاکتور رشد عصبی (NGF) یک فاکتور نوروتروفیک عصبی می باشد که در حفظ، بقاء و تمایز سلول های عصبی مرکزی و محیطی فعالیت دارد. این پروتیین سه زیرواحدی بوده که زیرواحد بتای آن دارای فعالیت اصلی است. براساس تحقیقات، به نظر می رسد که می توان از این فاکتور در درمان بسیاری از بیماری ها از جمله نوروپاتی های محیطی در ارتباط با دیابت، آلزایمر، پارکینسون، بیماری های پوستی و غیره استفاده کرد. به دلیل فضای اکسیداتیو پری پلاسم، بیان پروتیین نوترکیب NGF در میزبان پروکاریوتی باید در پری پلاسم صورت گیرد. شایان ذکر است که بیان هم زمان چپرون های سیتوپلاسمی، می تواند ترشح پروتیین های نوترکیب به فضای پری پلاسمی را تسهیل کرده و سبب افزایش حلالیت آن ها شود. در این تحقیق تاثیر چپرون های سیتوپلاسمی GroEL/GroES، DnaK/DnaJ،GrpE ، Trigger Factor (TF) بر میزان تولید پری پلاسمی پروتیین نوترکیب NGF مطالعه گردید. بدین منظور زیرواحدβ-NGF در وکتور بیانی pET39b (+) بصورت هم زمان با پلاسمیدهای چپرونی pG-Tf2، pTf16، pGro7،pKJE7 و pG-KJE8 در باکتری E. coli سویه DE3 بیان شد. نتایج بدست آمده نشان دادند که در حضور چپرون) TFپلاسمید چپرونی pTf16) تولید کل محتوای پروتیینی و پروتیین های پری پلاسمی افزایش داشته است. همچنین مجموع چپرون های DnaK/DnaJ و GroEL/GroES (پلاسمید چپرونی pG-KJE8) نیز تا حدودی سبب افزایش تولید شده اند، در حالی که بیان هر یک از چپرون های GroEL/GroES (پلاسمید چپرونی pGro7) و یا DnaK/DnaJ (پلاسمید چپرونیpKJE7) تاثیری بر بیان پروتیین نداشته اند. نتایج کشت سلول نیز نشان دهنده فعال بودن پروتیین تولیدی بوده و تمایز سلول ها به سلول های عصبی را نشان می دهد.