کلون کردن و بیان ژن هماگلوتینین ویروس آنفولانزا H9N2 در سلول Sf9

ویروس آنفولانزا یکی از مهمترین عوامل مرگ و میر بر اثر بیماری های تنفسی در طیور است که سالیانه خسارات زیادی را به صنعت پرورش طیور در سراسردنیا وارد می کند.پروتیین هماگلوتینین (HA) از عوامل اصلی در بیماری زایی این ویروس است لذا هدف از پژوهش حاضر کلون کردن و بیان این ژن در سلول Sf9 با استفاده از باکولو ویروس می باشد.

بعد از جداسازی ژنوم ویروس آنفولانزا H9N2 ، ژن HA توسط پرایمر های اختصاصی با روش های RT-PCR و PCR تکثیر و با کمک وکتور pFastBac Dual به بکمید منتقل گردید. بکمید نوترکیب واجد ژن HA به سلول میزبان DH10Bac انتقال داده شد. با ترانسفکت کردن سلول Sf9 با بکمید نوترکیب، بیان و میزان بیان پروتیین نوترکیب با روش های SDS-PAGE ، western blotting و بردفورد بررسی شد.

پروتیین حاصل از بکمید نوترکیب با استفاده از SDS PAGE بررسی و خلوص آن تایید شد. غلظت پروتیین نوترکیب در محلول رویی سلولهای Sf9 آلوده به ویروس نوترکیب µg/ml 138 تخمین و توسط western blotting تایید شد.

در تحقیق حاضر ژن HA بر روی وکتور PfastBacDual با موفقیت کلون شد و بعد از انتقال بر روی بکمید و ترانسفکت به سلول Sf9 بیان مناسبی از ژن در محلول رویی سلولهای Sf9 بدست آمد. با انجام آزمایشهای حیوانی ، این پروتیین می تواند به عنوان واکسن نوترکیب بر علیه آنفولانزا H9N2 مورد استفاده قرار گیرد.