زیرهمسانه سازی و بیان ژن blf1 بورخولدریا سودومالئی در ریشه های مویین گیاه تنباکو

Melioidosis یک بیماری مشترک بین انسان و حیوان است که توسط Burkholderia Pseudomallei ایجاد می شود. در حال حاضر هیچ واکسن موثری برای آن وجود ندارد. هدف از این تحقیق بیان ژن blf1 در گیاه تنباکو می باشد. با انتقال وکتور pBI121 به Agrobacterium tumefaciens، ژن blf1 به گیاه تنباکو منتقل شد و گیاه تراریخته کامل بدست آمد. از ریزنمونه گیاه تراریخته توسط Agrobacterium rhizogenes برای تهیه ریشه های مویین استفاده شد. وجود ژن blf1 در ریشه های مویین به دست آمده با روش PCR و وسترن بلات بررسی شد. میزان تولید آنتی ژن با روش الایزا اندازه گیری شد. نتایج آزمایش ساخت سازه ژن با درج blf1 در وکتور pBI121 حاوی ژن ctxB با استفاده از پرایمرهای عمومی با تکنیک PCR تایید شد. ریزنمونه تنباکو پس از تلقیح با Agrobacterium tumefaciens، روی محیط کشت MS حاوی هورمون های بنزیل آمینوپورین (BAP) و 1-نفتالین استیک اسید (1-NAA) قرار داده شد. پس از تشکیل کالوس و باززایی گیاهچه، نهال هایی با مریستم فعال جهت ریشه زایی به محیط بدون هورمون منتقل و بوته های تنباکوی تراریخته با ژن blf1 تولید و از طریق تست PCRصحت انتقال ژن تایید شد. با تهیه ریزنمونه ای از گیاهان تراریخته توسط آگروباکتریوم رایزوژنز، تلقیح و ریشه های مویین به دست آمد. در ریشه های مویین، ژن blf1 با استفاده از PCR و بیان آن با تکنیک وسترن بلات تایید شد. با استفاده از تکنیک الایزا، تولید آنتی ژن نوترکیب BLF1 در ریشه های مویین، 0.56 درصد پروتیین محلول کل تعیین گردید.