تشخیص نوروتوکسین کلستریدیوم بوتولینوم تیپ B به روش ساندویچ الایزا

 سموم بوتولینوم (BoNTs) جزء کشنده ترین ترکیباتی هستند که تاکنون شناخته شده  و عامل بیماری بوتولیسم می باشند. در حال حاضر، تشخیصBoNT در غذا به استفاده از سنجش زیستی روی موش آزمایشگاهی است که یک روش بسیار حساس (محدوده تشخیص pg mL-1 7 تا 20)  اما زمان بر می باشد. این روش سریع، اختصاصی و می تواند حساسیتی معادل آزمایش روی موش آزمایشگاهی دارد. هدف از این تحقیق استفاده از روش  ساندویچ الایزا جهت شناساییBoNT/B بود.

 پروتیین نوترکیب 370 اسید آمینه ای از انتهای کربوکسیل بخش اتصال دهنده سم BoNT/B با وزن مولکولی 45 کیلودالتون به عنوان آنتی ژن بیان و  به روش کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA خالص سازی شد. آنتی بادی IgG از سرم موشی و خرگوشی با روش کروماتوگرافی تمایلی رزین پروتیین G جداسازی و به روش SDS-PAGE و آزمون الایزا ، تاییدشد. حساسیت و اختصاصیت روش طراحی شده جهت تشخیص آنتی ژن نوترکیب BoNT/B-HcC  و توکسویید بوتولینوم تایپ B ارزیابی شد.

 غلظت آنتیبادی  موشی و خرگوشی تخلیص شده به ترتیب 3 و 5/4 میلی گرم از هر میلی لیتر سرم بود. حداقل غلظت پروتیین قابل شناسایی به روش الایزا غیر مستقیم با آنتی بادی تخلیص شده موشی و خرگوشی 475 و 118 پیکوگرم تعیین شد. با بهینه سازی روش ساندیچ الایزا حداقل30 نانوگرم از آنتی ژن نوترکیبBoNT/B-HcC  و 146 پیکوگرم ازBoNT/B با اختصاصیت بالا شناسایی شد.

 روش ساندویچ الایزای طراحی شده می تواند برای شناسایی دقیق و حساس سم کلستردیوم بوتولینوم تیپ B مورد استفاده قرار گیرد. لازم است در آینده کارآیی این روش برای تشخیص سم بوتولینوم در نمونه های محیطی و غذایی ارزیابی گردد.