جداسازی، شناسایی و اندازه گیری فعالیت آنزیم های فسفولیپاز A2 و هیالورونیداز زهر زنبور عسل ایرانی mellifera meda) (Apis

زهر زنبور عسل حاوی آنزیم هایی مختلفی نظیر هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 است که بعضی از آنها کاربرد دارویی و پزشکی دارند. در تحقیقات متعددی، فعالیت فسفولیپاز A2 و هیالورونیداز در گونه های مختلف زنبور عسل گزارش شده است اما گزارشی در مورد این آنزیم ها و چگونگی فعالیت آنها در زهز زنبور عسل ایرانی وجود ندارد. لذا هدف از این تحقیق جداسازی، شناسایی آنزیم های فسفولیپاز A2 و هیالورونیداز و اندازه گیری میزان فعالیت آنها در زهر خام و اجزای زهر زنبور عسل ایرانی (Apis mellifera meda) بود.  

ابتدا 100 میلی گرم زهر خام زنبور عسل با کمک کروماتوگرافی سفادکس G-50 در بافر استات آمونیوم 05/0 میلی مولار خالص سازی شد. جهت بررسی پروفایل پروتیینی زهر و  جزءبندی از روش الکتروفورز عمودی استفاده گردید. سپس مقدار پروتیین، فعالیت آنزیم فسفولیپاز A2 و هیالورونیداز در زهر خام و فراکسیو ن های جدا شده اندازه گیری شد. مقدار پروتیین در زهر خام عسل ایرانی و اجزای آن با استفاده از پروتیین سنجی بروش برادفورد تعیین گردید. میزان فعالیت آنزیم فسفولیپاز A2  با استفاده از سوسپانسیون زرده تخم مرغ به عنوان سوبسترا تعیین شد و میزان فعالیت هیالورونیداز روی هیالورونیک اسید به روش توربیدومتری آزمایش شد. 

نتایج اولیه نشان داد که 56 درصد زهر خام پروتیین بوده است. زهر خام به 3 پیک (جزء) مجزا شد. فعالیت فسفولیپاز A2 در زهر خام و پیک اول و دوم مشاهد شد. فراکسیون دوم بیشترین فعالیت فسفولیپازی را نشان داد. فعالیت هیالورونیدازی در زهرخام و تنها در پیک اول مشاهده شد. فعالیت بهینه آنزیم فسفولیپاز A2 در pH برابر 7 و دمای 37درجه سانتیگراد بدست آمد. در این مطالعه مشخص شد که فعالیت هیالورونیداز در زهر زنبور عسل ایران بیشترین فعالیت را در دمای 37 تا 39 درجه دارد و با افزایش درجه حرارت به تدریج فعالیت خود را از دست می دهد. همچنین نتایج این مطالعه نشان داد که pH ایده آل برای فعالیت آنزیم هیالورونیداز 5/5 می باشد.

زهر زنبور عسل ایرانی دارای هر دو فعالیت فسفولیپازی و هیالورونیدازی می باشد که با استفاده از کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون می توان آنها را جدا کرد. این بررسی می تواند به عنوان روشی برای جداسازی، تخلیص و اندازه گیری فعالیت آنزیم های هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 زهر زنبور عسل ایرانی معرفی شود. آنزیم های هیالورونیداز و فسفولیپاز A2 خالص سازی شده می توانند جهت استفاده در صنعت و تحقیقات مورد استفاده قرار گیرند.