طراحی و بیان نوترکیب پروتئین ایمنی زای STX1B-IpaD از اشریشیا کلی آنترو هموراژیک و شیگلا

باکتری های شیگلا و اشرشیاکلی خونریزی دهنده که قرابت زیادی با شیگلا دارد، از شایع ترین عوامل ایجادکننده اسهال های باکتریایی هستند و تاکنون واکسن کارآمدی علیه آنها تولید نشده است. باتوجه به نقش پروتیین IpaD و دخالت زیرواحد B انتروتوکسین شیگلا (StxB) در بیماریزایی شیگلا و اشرشیاکلی خونریزی دهنده (E.coli O157:H7)، پروتیین کایمر حاویSTX1B-IpaD طراحی گردید. هدف از این فعالیت، کلون، بیان هترولوگ و خالص سازی پروتیین کایمریک STX1B-IpaD به عنوان کاندید واکسنی چندگانه علیه انواع گونه های شیگلا و E.coli O157:H7 است.

ژن IpaD از یک ناقل نوترکیب جداسازی گردید (NdeI/BamHI) و در ناقل بیانی pET28a حاوی ژن STX1B زیرهمسانه سازی شد. سازه نوترکیب به درون سویه بیانی E.coli Rosetta (DE3) منتقل و در حضور پلاسمید نوترکیب در باکتری با روش PCR و هضم آنزیمی تایید شد. پروتیین نوترکیب تولیدشده به وسیله روش SDS-PAGE و وسترن بلات با آنتی بادی های استاندارد مورد تایید قرار گرفت. پروتیین نوترکیب STX1B-IpaD با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی، تخلیص و غلظت آن با روش برادفورد اندازه گیری شد.

نتایج PCR و هضم آنزیمی صحت کلونینگ را تایید نمود. الکتروفورز پروتیین نوترکیب STX1B-IpaD نشان داد وزن مولکولی آن در حدود 27 کیلودالتون می باشد. نتایج آزمون وسترن بلاتینگ تولید پروتیین نوترکیب را تایید کرد. غلظت پروتیین تولید شده بیش از 300 میکروگرم بر میلی لیتر محیط کشت بود.

یک روش موثر در تولید پروتیینهای نوترکیب، بهینه سازی کدونها و بیان در میزبان های هترولوگ است. پس از بررسی ایمنی زایی این پروتیین نوترکیب، میتوان از آن به عنوان کاندید واکسن کایمریک علیه باکتری های شیگلا و اشرشیاکلی خونریزی دهنده (EHEC) استفاده کرد.