استفاده از روش های مولکولار جهت تشخیص لپتوسپیرا

تشخیص سریع لپتوسپیرا یکی از ضروریات در درمان این بیماری زئونوز میباشد. عدم توانایی روش های سرولوژیک در تشخیص سریع این باکتری (این روش برای تشخیص و ایجاد پادتن دارند) موجب گردیده است که روش PCR به دلیل حساسیت و دقت بالای آن به عنوان کاندیدای مناسبی بدین منظور مطرح شد. در ایران نیز با توجه به شیوع فرم حاد و مزمن این بیماری باید درمان و یا کنترل آن برنامهریزی گردد و تشخیص عامل بیماری اولین گام بدین منظور میباشد. در این تحقیق جهت تشخیص سریع این بیماری از تکنیک PCR استفاده گردید. که از سه سروواریته غالب شناخته شده در ایران L.canicola, L. grippotyphosa, L. sejroe hardjo مورد مطالعه قرار گرفت. بدین منظور بهعنوان هدف دو نقطه ژنی اختصاصی برای لپتوسپیراهای پاتوژن انتخاب گردید پرایمرهای G1/G2 با شناسایی قطعه اول محصول PCR به طول 285bp ایجاد نمودند و پرایمرهای 590DIR1/590REV2 با هدف قرار دادن قسمتی از یک ناحیه جدید تکرار شونده ژنوم محصول PCR به طول 571bp ایجاد نمودند. برای تائید محصول PCR از آنزیمهای محدودگر استفاده گردید که از آنزیم AluI برای محصول 571bp و آنزیم MboI برای محصول 285bp بکار رفت.