همسانه سازی و بیان ژن زیرواحدB توکسین حساس به حرارت (LTB) باکتری اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک به عنوان کاندیدای واکسن

باکتری اشریشیا کلی انتروتوکسیژنیک (ETEC) شایع ترین عوامل بیماری اسهال است که هر ساله سبب مرگ تعداد زیادی در جهان می شود. طراحی و ساخت واکسن علیه این بیماری از اهداف سازمان های بهداشتی نظیر سازمان بهداشت جهانی است. از مهم ترین عوامل ویرولانس باکتری، توکسین حساس به حرارت (LT) است که به عنوان کاندیدای واکسن نیز مطرح است. هدف این مطالعه، بیان ژن زیرواحد B توکسین حساس به حرارت (LTB) به منظور بررسی ایمنی زایی بود.
اطلاعات مربوط به ژن LTB از بانک ژن استخراج و طراحی پرایمر صورت گرفت. با استفاده از واکنش PCR، ژن مورد نظر از ژنوم باکتری تکثیر شده و با آنزیم های محدودالاثر در وکتور pBluescriptII SK و سپس در وکتور بیانی pET28a، همسانه سازی شد. تحت القای IPTG، بیان ژن LTB بهینه سازی شد و پروتئین مورد نظر توسط الکتروفورز مورد ارزیابی قرار گرفت.
پروتئین نوترکیب با وزن مولکولی 5/15 کیلودالتونی در مقایسه با کنترل دارای بیان قابل ملاحظه ای بود. پروتئین مورد نظر با استفاده از آنتی بادی ضدزیرواحد B کلراتوکسین با روش ایمونوبلاتینگ مورد تایید قرار گرفت.
با توجه به ایمونوژن بودن پروتئین LTB، می توان از آن در طراحی واکسن همچنین به عنوان ادجوان قوی سیستم ایمنی مخاطی استفاده نمود.