تشخیص همزمان عوامل شایع مننژیت باکتریال: نیسریا مننژیتیدیس، هموفیلوس انفلونزا و استرپتوکوکوس پنومونیه با Multiplex PCR

خلاصه درمان فوری مننژیت باکتریال به عنوان یک اورژانش پزشکی مستلزم تشخیص سریع و دقیق می باشد. این امر می تواند از مرگ و میر و یا عوارض بعدی پیشگیری نماید. از این رو، هدف این تحقیق راه اندازی روش تشخیص مولکولی Multiplex PCR جهت شناسایی مننژیت باکتریال و تشخیص عوامل شایع آن است. در این تحقیق، از پرایمر universal و نیز پرایمرهای اختصاصی استفاده شد. ژنوم 20 سویه باکتریایی استخراج و با شرایط استاندارد شده، طی دو مرحله PCR انجام گردید. محصول با ژل 1 درصد آگاروز الکتروفورز و نتایج با استفاده از آنزیم Hea III تایید گردید. استخراج ژنوم باکتریایی (حداقل 10 عدد باکتری در هر میلی لیتر) امکان رد یابی آن را اثبات نمود. چنانچه استفاده از پرایمر ساخته شده از ژن 16S rRNA امکان تکثیر یک قطعه 1000 جفت بازی را فراهم کرد. استفاده از پرایمر اختصاصی به ترتیب برای نیسریا مننژیتیدیس یک قطعه 700 جفت بازی، هموفیلوس انفلونزآ یک قطعه 500 جفت بازی و استرپتوکوکوس پنومونیه یک قطعه 300 جفت بازی را ایجاد نمود. هر یک از 20 گونه باکتریایی استفاده شده در این تحقیق همگی قابل ردیابی و در الکتروفورز باند مورد نظر را نشان دادند. بر اساس یافته های این تحقیق، با استفاده از روش مولکولی می توان: در فاصله حدود 3 ساعت وجود عفونت باکتریایی را نشان داد و عوامل شایع آن را شناسایی نمود. احتمالا با استفاده از این روش در آزمایشگاه های تشخیص طبی بتوان ضمن ارتقای سطح کیفی سرعت تشخیص را نیز افزایش داد. به علاوه، با ادامه تحقیق امکان ایجاد بهبود و کوتاه کردن زمان وجود دارد.