تهیه و تخلیص آنتی ژن A60) 60)از سیتو پلاسم مایکوباکتریوم بوویس سویه BCG

تهیه و تخلیص آنتی (A60)60 از سیتوپلاسم BCG در این تحقیق از روش کروماتوگرافی حذفی توسط ستون سفارز 4B برای تخلیص A60 از سیتوپلاسم BCG استفاده گردید. برای تایید تخلیص آنتی ژن، تکنیک ایمونوالکتروفوز با استفاده از آنتی بادی های Anti BCG و Anti A60 به کار گرفته شد. آنتی ژن 60 تخلیص شده با روش های الکتروفوز در ژل آگارز 0.5 درصد و دبل دیفوژن نیز مورد بررسی قرار گرفت. برای بررسی وجود آنتی ژن از هر دو قسمت سیتوپلاسم و دیواره سلولی باکتری آزمایش دات بلات با استفاده از آنتی بادی Anti A60 انجام شد. برای مطالعه ساختاری این آنتی ژن اجزای آنتی ژن در SDS-PAGE تفکیک شدند و به کاغذ نیتروسلولز منتقل شده و آزمایش وسترن بلات با استفاده آنتی بادی Anti A60 انجام شد.
آنتی ژن تخلیص شده در ایمونوالکتروفوز متقاطع با استفاده از Anti BCG و Anti A60 به صورت کم حرکت ترین جز سیتوپلاسم نمودار گردید. آنتی ژن مذکور در الکتروفوز با ژل آگارز به صورت تک باند مشاهده گردید و در ایمونودیفیوژن در مواجه با Anti BCG دو خط رسوبی تشکیل داد. در بررسی با روش دات بلاتینگ هم سیتوپلاسم و هم دیواره سلولی باکتری با آنتی بادی Anti A60 واکنش مثبت نشان دادند. وقتی اجزایA60 با روش SDS-PAGE تفکیک شدند و وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی بادی Anti A60 انجام شد، اجزای پروتئینی با اوزان، 35، 38، 40، 46 و 65 کیلو دالتون شناسایی گردید.
نتایج به دست آمده مبین این است که A60 یک ماکرومولکول با وزن مولکولی 10000-1000 کیلو دالتون در مایکوباکتریوم بویس سویه BCG و دارای اجزای متعدد پروتئینی است. A60 هم در سیتوپلاسم و هم در دیواره سلولی BCG موجود است و می توان آن را با استفاده از کروماتوگرافی حذفی، از سیتوپلاسم واکسن BCG که خوشبختانه در کشور ما نیز تولید می گردد، به راحتی تخلیص نمود.