تشخیص سریع باکتری های مولد بیماری تب مالت با استفاده از واکنش زنجیرهای پلی مراز

تب مالت یک بیماری مشترک بین انسان و حیوانات مختلف است که توسط گونه های بروسلا ایجاد میشود. اگرچه این بیماری بهندرت کشنده میباشد، اما در صورت عدم تشخیص سریع و مناسب، در همه گیری ها و استفاده عمدی در جنگهای بیولوژیک، صدمات شدیدی به تسهیلات مراقبت پزشکی وارد میکند. با توجه به محدودیتهایی مثل زمان طولانی، دقت پایین، حساسیت کم و نتایج مثبت و منفی کاذب در روش های تشخیص سنتی بروسلاها، هدف از این مطالعه طراحی روش مولکولی PCR برای تشخیص سریع این ارگانیسمها میباشد.
ژن bcsp که اختصاصی جنس بروسلا میباشد انتخاب و پرایمرهای اختصاصی آن به کمک نرم افزار Primer express v3/0 طراحی شد. برای تعیین ویژگی روش، ژنوم انواعی از باکتری های کنترل منفی استفاده گردید. به منظور تعیین حساسیت و محاسبه حد تشخیص از کلونینگ محصولات PCR در پلاسمید pTZ57R/T استفاده شد.
الکتروفورز محصول PCR ژن bcsp برای باکتری های استاندارد B.abortus و B.melitensis باندی به اندازه 150 جفتباز نشان داد. آزمایشات PCR با استفاده از ژنوم باکتری های کنترل منفی، هیچ باندی در ژل آگاروز ایجاد نکرد. کلونینگ محصولات PCR در وکتور pTZ57R/T به کمک واکنش زنجیرهای پلیمراز و توالییابی تایید شد.
پرایمر طراحی شده برای ژن اختصاصی جنس بروسلا در این روش میتواند با حساسیت تشخیص 1500 کپی از ژنوم برای شناسایی این ارگانیسم به کار رود و به این ترتیب هزینه و زمان مورد نیاز برای تشخیص را کاهش دهد.