کلونینگ و بیان دومین انتهای آمینی فلاژلین پسودوموناس آئروژینوزا و ارزیابی آنتی بادی های تولید شده بر علیه آن در مهار حرکت پسودوموناس آئروژینوزا

پسودوموناس آئروژینوزا یک باکتری بیماری زای فرصت طلب است. این باکتری عفونت های شدید و کشنده در افرادی که ایمنی سرکوب شده دارند، ایجاد می کند. باکتری دارای یک فلاژل قطبی است. فلاژل و فلاژلین، زیر واحد ساختاری فلاژل، نقش مهمی در بیماری زایی پسودوموناس آئروژینوزا بازی می کند. فلاژلین از راه میانکنش دومین های انتهای آمینی خود با TLR-5، پاسخ های ایمنی را بر می انگیزد. هدف ما در این مطالعه کلونینگ و بیان انتهای آمینی فلاژلین پسودوموناس آئروژینوزا و ارزیابی آنتی بادی های تولید شده بر علیه آن در مهار حرکت پسودوموناس آئروژینوزا بود.
ناحیه ی کد کننده ی اسید آمینه های 1-161 فلاژلین با PCR تکثیر و در وکتور pET28a کلون شد. پروتئین نوترکیب در میزبان بیانی BL21(DE3) بیان و با استفاده از ستون Ni2+-NTA خالص گردید. واکنش ایمنی پروتئین نوترکیب با آزمون وسترن بلات مورد بررسی قرار گرفت. پروتئین انتهای آمینی فلاژلین به خرگوش تزریق و از آنتی سرم تولید شده در بدن خرگوش برای مهار حرکت پسودوموناس آئروژینوزا M8821 استفاده شد.
انتهای آمینی فلاژلین به خوبی در میزبان بیانی اشریشیاکلی BL21(DE3) بیان شد. آنتی بادی های ضد فلاژلین و انتهای آمینی فلاژلین با پروتئین نوترکیب واکنش نشان دادند. آزمون مهار حرکت باکتری ثابت کرد که آنتی بادی های پلی کلونال برعلیه انتهای آمینی فلاژلین قادرند حرکت پسودوموناس آئروژینوزا M8821 را مهار کنند.
دومین های انتهای آمینی فلاژلین ممکن است در طراحی واکسن های نوترکیب بر علیه عفونت های پسودوموناس آئروژینوزا مورد استفاده قرار گیرند. واژگان کلیدی: انتهای آمینی فلاژلین، پسودوموناس آئروژینوزا، کلونینگ، مهار حرکت