طراحی و ساخت حامل انتحاری pDS132::∆virG به منظور حذف ژن virG در شیگلا فلکسنری 2a برای تولید سویه واکسنی زنده تخفیف حدت یافته شیگلا

سویه های شیگلا باکتری های گرم منفی هستند که واجد توانایی ورود به درون سلول های غیر فاگوسیتیی، از طریق ترشح پروتئین های افکتور (که آنتی ژن های تهاجمی نامیده می شوند (Ipas)) می باشند. یکی از مهمترین آنها پروتئینvirG است. واکسن های زنده تخفیف حدت یافته شیگلا، پاسخ های امیدوار کننده ای را در ایجاد ایمنی حفاظتی در مطالعات بالینی بر روی انسان از خود نشان داده اند. در شرایط حاضر، ساخت سویه های کاندید واکسنی شیگلا بر اساس استفاده از سیستم های تبادل آللی مورد توجه قرار گرفته است. هدف از این مطالعه، طراحی و ساخت حامل pDS132::∆virG به عنوان یک ناقل انتحاری برای حذف هدفمند بخشی از ژن virG در سویه شیگلا فلکسنری 2a بود.
در این مطالعه کاربردی، گونه و سرووار شیگلای جدا شده با استفاده از آزمایش سرم شناسی و واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) مورد تایید قرار گرفت. آغازگرهای شناسایی ژن virG طراحی و سپس در حامل pGEM-5zf همسانه سازی و تعیین توالی گردید. بر اساس نقشه برش آنزیمی ژن virG، 1751 جفت باز از ژن virG با استفاده از آنزیم محدودکننده HincП حذف و ژن جهش یافته ∆virG به طور موفقیت آمیزی ایجاد گردید. حامل pGEM∆virG با استفاده از آنزیم های SphI و SalI هضم گردید و سپس در حامل انتحاری (pSD132) همسانه سازی شد. صحت فرآیند با آزمایش های فنوتیپی و ژنوتیپی تایید گردید.
سویه شیگلا فلکسنری 2a با آزمایش سرم شناسی و PCR مورد تایید قرار گرفت. توالی ژن virG سویه بومی با سویه های ثبت شده در بانک ژنی به لحاظ ترادف ژنی یکسان بود. حامل انتحاری pDS132::∆virG با در بر داشتن 1484 جفت باز که از ژن virG مشتق شده است، بنابراین می تواند به عنوان یک ناقل انتحاری اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن virG در سویه شیگلا فلکسنری 2a به کار رود.
استفاده از سیستم های انتحاری ایجاد جهش هدفمند را تسهیل و در مقایسه با سایر روش های ابتدایی مانند پاساژ متوالی روش اختصاصی و موثرتری می باشد.